[发明专利]一种虫草花多糖的提取方法

摘要

本发明提供了一种虫草花多糖的提取方法，所述的提取方法包括如下步骤：粉碎、水提、一次醇沉、酶解、脱蛋白、二次醇沉、超滤、柱层析；本发明提取方法产品回收率高、纯度好，虫草花多糖得率大于1.8％，多糖的纯度大于90.0％；本发明提取方法工艺简单，所用试剂易得，生产成本低，易于实现工业化。

主权项

一种虫草花多糖的提取方法，其特征在于，所述的提取方法按如下步骤进行：(1)粉碎：将干燥的虫草花进行粉碎并过筛，得到虫草花粉末；(2)水提：将步骤(1)所得虫草花粉末与蒸馏水以料液质量比1：20～80混合，加热煮沸2～3h，并辅以超声波辅助提取，之后离心10～15min，取上清液，离心所得残渣重复水提3～4次，合并各次所得上清液，浓缩至原体积的1/4～1/10，得到多糖提取液；(3)一次醇沉：温度4～25℃下，将步骤(2)所得多糖提取液与食用酒精以体积比1：1.5～4混合，进行醇沉24～30h，沉淀析出，离心10～15min，取离心所得固体物质重复醇沉2～3次，得到粗多糖；(4)酶解：将步骤(3)所得粗多糖溶于30～40质量倍的蒸馏水中，用Na₂CO₃水溶液调节pH值为7.2～7.8，得到粗多糖溶液，加入胰蛋白酶、甲苯，在35～37℃下恒温水解18～24h，之后浓缩至原体积的1/4～1/2，得到蛋白酶解液；所述胰蛋白酶的活性为8000～10000U/g；所述胰蛋白酶的加入量为0.05～0.1g/1g粗多糖；所述甲苯的体积用量为2.5～3.5mL/1g粗多糖；(5)脱蛋白：将步骤(4)所得蛋白酶解液与Sevag试剂以体积比1：2.5～3混合，常温抽提1～3h，之后离心10～15min，取上清液，将该上清液重复脱蛋白2～3次，之后浓缩至原体积的1/4～1/3，得到脱蛋白多糖液；所述的Sevag试剂为氯仿和正丁醇以体积比4：1配制而成的混合液；(6)二次醇沉：温度4～25℃下，将步骤(5)所得脱蛋白多糖液与食用酒精以体积比1：1.5～4.5混合，进行醇沉24～30h，沉淀析出，离心10～15min，取离心所得固体物质室温晾干，得到多糖粗产物；(7)超滤、柱层析：将步骤(6)所得多糖粗产物用30～40质量倍的蒸馏水溶解，再用超滤膜进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，于常温下进行Sephadex G‑100柱层析纯化，洗脱剂为重蒸水，收集含多糖的洗脱液，冷冻干燥，得到虫草花多糖。