[发明专利]一种同步筛查转基因植物6种调控元件的多重PCR引物及检测方法

摘要

本发明公开了一种针对目前我国获得安全证书的转基因植物及其产品中常用调控元件的多重PCR筛查检测引物及检测方法，所述引物具有较强的特异性，能够用于多重PCR筛查检测分析。所述检测方法提供了一种操作简便、扩展性能好、灵敏度高的转基因筛查检测方法，实现了转基因植物多种调控元件同步检测。利用毛细管电泳对PCR扩增产物进行分析，其片段大小区分率可达数个碱基，分辨率高。本发明的引物和检测方法为转基因植物提供了一种简单、方便、有效、可靠的高通量筛查检测方法。本发明建立的多重PCR反应体系不仅可以检测转基因植物调控元件，而且还能扩展到其他转基因元件筛查检测。

主权项

1.一种同步筛查转基因植物6种调控元件的多重PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)合成以下引物：P‑FMV35S‑F：5'‑CAGCATTCCAGATTGGGTTCA‑3'；P‑FMV35S‑R：5'‑CTTTTGGCTAATGGTTTGGAGAC‑3'；P‑CaMV35S‑F：5'‑GCTCCTACAAATGCCATCATTGC‑3'；P‑CaMV35S‑R：5'‑GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC‑3'；P‑NOS‑F：5'‑GCCGTTTTACGTTTGGAACTG‑3'；P‑NOS‑R：5'‑TTATGGAACGTCAGTGGAGC‑3'；T‑NOS‑F：5'‑GCATGACGTTATTTATGAGATGGG‑3'；T‑NOS‑R：5'‑GACACCGCGCGCGATAATTTATCC‑3'；T‑CaMV35S‑F：5'‑GAATCCTGTTGCCGGTCTTG‑3'；T‑CaMV35S‑R：5'‑TTATCCTAGTTTGCGCGCTA‑3'；T‑E93’‑F：5'‑TTATGGCATTGGGAAAACTGT‑3'；T‑E93’‑R：5'‑GGTCATTAGAGGCCACGATT‑3'；(2)制备待测DNA稀释液；(3)配制PCR反应体系；(4)进行PCR检测；(5)取PCR反应产物进行毛细管电泳；步骤(1)中P‑NOS引物和T‑E93’引物的浓度为0.3μmol/L，P‑CaMV35S引物的浓度为0.15μmol/L，P‑FMV35S引物、T‑NOS引物、T‑CaMV35S引物的浓度均为0.2μmol/L；步骤(2)所述制备的DNA稀释液的浓度为25ng/μL；94℃预变性5min；然后进入35个循环，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s；循环结束后72℃延伸3min。