[发明专利]一种以芽孢型益生菌为粘膜递送载体的禽流感通用疫苗的构建方法及应用

摘要

本发明提供了一种宿主菌，本发明还提供了一种禽流感通用疫苗，所述禽流感通用疫苗以芽孢型益生菌为粘膜递送载体。本发明首次将H7N9等A型禽流感病毒亚型的CTL表位肽、细胞因子IL‑2与枯草芽孢粘膜免疫疫苗载体三者有机结合，优势互补。针对H7N9、H5N1、H5N6、H7N9、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2、H10N7等A型禽流感病毒亚型设计和筛选CTL表位抗原，利用芽孢载体递送抗原表位，通过芽孢以及芽孢展示的重组IL‑2作为佐剂，调节免疫类型和免疫反应水平。

主权项

一种宿主菌，其特征在于，所述宿主菌通过以下方法制备而成：(1)将CotB基因启动子序列、CotB编码序列、连接体的核苷酸序列和IL‑2的核苷酸序列依次连接到第一表达载体，得到表达cotB‑linker‑IL2融合蛋白的第一重组表达载体；(2)在所述步骤(1)中第一重组表达载体插入片段外单酶切使得所述第一重组表达载体线性化，然后转化入第一芽孢杆菌感受态细胞，筛选得到表达CotB‑linker‑IL‑2融合蛋白的第一阳性株；(3)将CotC基因启动子序列、CotC编码序列和CTL表位肽的核苷酸序列依次连接到第二表达载体，得到表达CotC‑CTL epitopes融合蛋白的第二重组表达载体；(4)在所述步骤(3)中第二重组表达载体插入片段外单酶切使得所述第二重组表达载体线性化，然后转化入第二芽孢杆菌感受态细胞,筛选得到表达CotC‑CTLepitopes融合蛋白的第二阳性株；(5)抽提所述步骤(4)中表达CotC‑CTLepitopes融合蛋白的第二阳性株的染色体，转化入由所述步骤(2)中表达IL‑2CotB‑linker‑IL‑2融合蛋白的第一阳性株制备的感受态细胞，筛选同时表达CotB‑IL2融合蛋白和CotC‑CTLepitopes融合蛋白的阳性克隆，即得所述宿主菌。