[发明专利]半导体芯片高通量合成核苷酸池及其组装双链DNA的方法有效
申请号: | 201610272253.3 | 申请日: | 2016-04-28 |
公开(公告)号: | CN105950609A | 公开(公告)日: | 2016-09-21 |
发明(设计)人: | 齐金才;钟云鹏;刁文一;柳伟强;陈文柱;杨平 | 申请(专利权)人: | 苏州泓迅生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 苏州睿昊知识产权代理事务所(普通合伙) 32277 | 代理人: | 伍见 |
地址: | 215123 江苏省苏州市工*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明涉及一种半导体芯片高通量合成核苷酸池及其组装双链DNA的方法,包括以下步骤:将预合成的双链DNA分成多个DNA片段;用DNA片段设计核苷酸;以核苷酸作为引物,在引物的两端分别加上序列,合成核苷酸序列;用含有生物素标记的引物进行第一轮扩增,获得第一轮PCR产物;用至少一种重组酶重组第一轮PCR产物,得到PCR混合物;纯化PCR混合物;纯化后的PCR混合物进行第二轮PCR,将核苷酸片段进行拼接,获得拼接后的PCR产物;用设计的首尾引物,对PCR产物进行第三轮PCR扩增,获得双链DNA片段。采用本方法进行的核苷酸池合成以及双链DNA合成与组装,成本低,一次合成的通量高。 | ||
搜索关键词: | 半导体 芯片 通量 合成 核苷酸 及其 组装 dna 方法 | ||
【主权项】:
一种半导体芯片高通量合成核苷酸池及其组装双链DNA的方法,以半导体芯片合成核苷酸池,用合成的核苷酸池组装成双链DNA,其特征在于,包括以下步骤:(1)将预合成的双链DNA分成多个DNA片段;(2)用(1)中获得的DNA片段设计核苷酸;(3)以(2)中的核苷酸作为引物,在引物的两端分别加上序列,合成核苷酸序列;(4)用含有生物素标记的引物进行第一轮扩增,获得第一轮PCR产物;(5)用至少一种重组酶重组(4)中获得的第一轮PCR产物,得到PCR混合物;(6)纯化(5)中的PCR混合物;(7)用(6)中纯化后的PCR混合物进行第二轮PCR,将核苷酸片段进行拼接,获得拼接后的PCR产物;(8)用设计的首尾引物,对(7)中的PCR产物进行第三轮PCR扩增,获得双链DNA片段。
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