[发明专利]一种阿胶中驴、马源巢式荧光PCR检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法及应用

摘要

本发明提供一种阿胶中驴、马源巢式荧光PCR检测引物、探针组合物、试剂盒及检测方法及应用，涉及分子生物学技术领域，利用本发明的引物、探针组合物以及多重巢式荧光PCR检测试剂盒可以快速鉴定出阿胶中驴、马源成分。本发明针对阿胶中微量DNA或降解DNA，通过巢式PCR及小片段扩增技术，大大提高了引物及探针有效识别靶点的几率，因此大大提高检测准确性和灵敏度；两步PCR扩增在同一体系进行，具有闭管操作、污染率低、检测灵敏度高、特异性好、准确度高、通量大等有益效果。

主权项

一种同时鉴别阿胶中驴、马源性成分的多重巢式荧光PCR检测引物、探针组合物，其特征在于，包括：(1)多重巢式荧光PCR检测驴、马源性通用外侧引物，其核苷酸序列如下：正向引物序列：5'CAAGAATTATTTCTCCTCGCATAAGCC 3'，如SEQ NO.1所示；反向引物序列：5'GGTTTGTGTTTGCCGAGTTCCTTT 3'，如SEQ NO.2所示；(2)多重巢式荧光PCR检测驴、马源性通用内侧引物，其核苷酸序列如下：正向引物序列：5'GCCTATATCAGAACGAATACTCAC 3'，如SEQ NO.3所示；反向引物序列：5'CATGCCTGTGTTGGGTTAA 3'，如SEQ NO.4所示；(3)驴特异性探针，其核苷酸序列如下：5'CAACAAAATAGACACAACCCAAAATGTTG 3'，如SEQ NO.5所示；(4)马特异性探针，其核苷酸序列如下：5'CAACAAGATAGGGATAATCCAAAAACTGTTG 3'，如SEQ NO.6所示；其中，所述驴特异性探针和马特异性探针的5’端修饰有报告基团，3’端修饰有淬灭基团，所述报告基团为FAM、HEX、TAMRA、ROX、CY5中的任一种，所述淬灭基团为Dabcyl、BHQ1、BHQ2中的任一种。