[发明专利]一种MIM-I-BAR蛋白提取纯化方法

摘要

本发明公开了一种MIM‑I‑BAR蛋白提取纯化方法，包括以下步骤：(1)选择能够表达MIM‑I‑BAR蛋白的表达菌进行培养，促使MIM‑I‑BAR蛋白表达，收集菌体；(2)取上述菌体，用细胞裂解液重悬细胞，‑80℃冷冻；(3)解冻，超声破碎，离心取上清，过滤；(4)先平衡层析柱，洗去杂蛋白；再次洗去杂蛋白；然后将步骤(3)所得样品上样，洗脱目的蛋白，收集蛋白流穿液；(5)将收集的蛋白流穿液超滤离心，去除流穿液，加入PBS离心，得下层沉淀，即为所述MIM‑I‑BAR蛋白。相对于现有技术，本发明方法简单，并且能够增加蛋白在裂解液中的溶解量，从而避免了包涵体的提取过程；同时大大提高了蛋白的纯化效果。

主权项

1.一种MIM‑I‑BAR蛋白提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选择能够表达MIM‑I‑BAR蛋白的表达菌进行培养，促使MIM‑I‑BAR蛋白表达，收集菌体；(2)取上述菌体，用细胞裂解液重悬细胞，‑80℃冷冻；所述细胞裂解液为包含：20mM pH 7‑8磷酸钠缓冲液，500mM NaCl，5‑15mM咪唑，1mM PMSF，0.1‑0.5mg/ml溶菌酶，蛋白酶抑制剂按常规用量添加；(3)解冻，超声破碎，离心取上清，过滤；(4)先平衡层析柱，然后将步骤(3)所得样品上样，洗去杂蛋白，再洗脱目的蛋白，收集蛋白流穿液；所述层析柱为Ni²⁺‑NTA亲和层析柱；平衡层析柱用缓冲液A：20mM pH 7‑8磷酸钠缓冲液，500mM NaCl，5‑15mM咪唑；洗去杂蛋白用缓冲液B：20mM pH 7‑8磷酸钠缓冲液，500mM NaCl，80‑100mM咪唑；洗脱目的蛋白用的缓冲液为两种缓冲液，使用顺序依次为缓冲液C1：20mM pH 7‑8磷酸钠缓冲液，500mM NaCl，110‑130mM咪唑；以及缓冲液C2：20mM pH 7‑8磷酸钠缓冲液，500mM NaCl，140‑160mM咪唑；(5)平衡脱盐柱，将步骤(4)所得样品上样，丢弃流穿液，加入洗脱缓冲液，收集流穿液；(6)将收集的蛋白流穿液超滤离心，去除流穿液，加入PBS离心，得下层沉淀，即为所述MIM‑I‑BAR蛋白。