[发明专利]制备具有高效肿瘤杀伤性DC-CIK免疫细胞的方法及制得的DC-CIK免疫细胞

摘要

本发明公开了一种制备具有高效肿瘤杀伤性DC-CIK免疫细胞的方法及制得的DC-CIK免疫细胞，特别是在体外利用细胞因子高效诱导外周血单个核细胞分化DC-CIK细胞中添加Anti-PD-1MAb、Anti-PDL-1MAb后其肿瘤杀伤活性显著提高。本发明采用美天旎公司生产的TexMACS免疫细胞培养基和自体血清、多种细胞因子及联合培养技术对DC、CIK分别进行诱导培养,并且在合适的时间点分别将DC和CIK相关的PD-1位点进行封闭，然后在一定时间点将细胞混合培养及应用，最终混合细胞的肿瘤杀伤活性得到了很大的提高具有更高的临床应用价值。

主权项

一种制备具有高效肿瘤杀伤性DC‑CIK免疫细胞的方法，其特征在于，以外周血为原材料，通过Ficoll密度梯度离心法分离获得PBMC和上层血浆，上层血浆采用灭活并冻融的方法获得自体血清，自体血清配合免疫细胞培养基及多种细胞因子，将分离的PBMC分别诱导DC、CIK，CIK细胞每隔2天扩大培养、DC细胞在第4天扩大培养，然后在第7天进行混合培养，DC细胞在第5天用TNF‑α进行刺激以促进其分化成熟，然后加入Anti‑PDL‑1MAb对DC细胞进行封闭并在封闭12‑24h后将全部DC细胞回收加入到CIK细胞诱导体系中共培养；CIK细胞在第7天加入CD28、CD3单抗提高CIK的扩增效率，在诱导培养的第13‑15天使用Anti‑PD‑1MAb对CIK细胞的PD‑1抗原进行封闭，并在封闭12‑24h后回收全部细胞。