[发明专利]一种海洋黑曲霉生产耐盐纤维素酶的发酵方法

摘要

本发明提供一种海洋黑曲霉生产耐盐纤维素酶的发酵方法，通过斜面孢子的制备与保藏、摇瓶二级扩大培养、种子罐放大培养、发酵罐发酵得到。所用的海洋黑曲霉，保藏中心保藏编号为CCTCC NO：M2010132，菌种名称为Aspergillus sp. ZJUBE 2010。通过本发明方法获得的耐盐纤维素酶，能广泛用于工业高盐环境，也为富含盐的纤维素资源提供一种新的利用途径。本发明方法所用培养基价廉，成本低，培养过程简单，易于控制与改进，调控生长阶段与产酶阶段的不同温度，使得纤维素酶活更高。本发明方法为耐盐纤维素酶的工厂化生产以及应用提供依据和基础。

主权项

一种海洋黑曲霉生产耐盐纤维素酶的发酵方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）斜面孢子的制备与保藏：将外购的海洋黑曲霉接种到PDA斜面培养基，28℃下培养96小时，得到斜面孢子，4℃下保存；（2）摇瓶二级扩大培养：配制300~400ml摇瓶种子培养基分装到锥形瓶中，121℃灭菌，利用灭菌的蒸馏水洗脱斜面获得黑曲霉孢子液，接种于摇瓶种子培养基中，并于35~38℃，180~200r/min条件下培养24~36小时获得二级扩大种子液；（3）种子罐放大培养：在种子发酵罐中配制35 L种子罐培养基，121℃灭菌，取摇瓶扩大的种子液接种到种子罐中，发酵罐温度为35~38℃，通气比为1 V/V·min，罐压为0.02~0.1 Mpa，转速180r/min，发酵48小时后获得种子罐放大种子液；（4）500 L发酵罐发酵：在发酵罐中配制350 L发酵培养基，121℃灭菌，将种子罐的种子液接种到种子罐中，消泡剂0.03%，通气比为0.5~2.5 V/V·min，罐压为0.02~0.1 Mpa，转速180r/min，温度36~40℃条件发酵36~60小时后，调节温度为26~30℃，继续发酵36~60小时后得到纤维素酶粗酶液，即为所述 耐盐纤维素酶。