[发明专利]一种用于扩增低浓度突变靶序列的引物和探针的设计方法有效
| 申请号： | 201610281016.3 | 申请日： | 2016-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN105861678B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 邹鸿志;牛智通 | 申请（专利权）人： | 广州市康立明生物科技有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6811 | 分类号： | C12Q1/6811;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 11111 北京市万慧达律师事务所 | 代理人： | 谢敏楠 |
| 地址： | 510535 广东省广州市高新技*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于扩增低浓度突变靶序列的引物和探针的设计方法。首先确定欲扩增靶序列的突变位置（突变点，即0位）；然后在突变点的负方向选取包含0位碱基在内的15~25bp的核酸片段作为正向引物，在突变点的正方向从‑1位碱基或者0位碱基起选取12~25bp核酸序列作为扩增体系的探针序列；最后在探针序列的3’方向下游合适位置，按照常规方法设计反向引物。根据本发明的方法设计的引物和探针，可在较高含量野生型模板的背景下有效（高特异性和高效性）扩增目的片段，尤其是针对基因突变中的点突变、缺失突变以及插入突变等，结合荧光实时PCR技术，可十分有效的解决目前临床上肿瘤检测和药物敏感性检测中灵敏度不足的难点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 扩增 浓度 突变 序列 引物 探针 设计 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于扩增低浓度突变靶序列的引物和探针的设计方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1.定义：待扩增突变靶序列上的突变点碱基的位数为0位，突变点碱基5’方向为负方向，3’方向为正方向，从突变点向5’方向的碱基的位数依次称为-1，-2，-3…… 位；从突变点向3’方向的碱基位数依次称为+1，+2，+3 ……位；/nS2.确定待扩增突变靶序列的0位；/nS3.在突变点的负方向，选取包含0位碱基在内的15~25bp的核酸片段作为扩增的前向引物；前向引物的-1位至-4位可按照测定的需要引入单碱基或多碱基错配以调整扩增的特异性和扩增的效率；/nS4.在突变点的正方向，从-1位碱基或者0位碱基起选取12~25bp核酸序列作为扩增体系的探针序列；/nS5.在探针序列的3’方向下游合适位置，按照常规引物设计方法设计反向引物。/n
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