[发明专利]7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷及其荧光标记物的合成方法

摘要

本发明涉及一种7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷及其荧光标记物的合成方法。本发明以胆固醇和壬二酸为原料，以1,3‑二环已基碳化二亚胺和4‑二甲氨基吡啶作为合成反应的催化剂，二氯甲烷作为溶剂，建立氧化体系并通过建立脂缩反应等最终得到7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷。本发明提供了一种操作简便、原料易得，杂质含量少、生产成本低的7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷的合成方法，以及提供一种引入NBD‑荧光基团的7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷的合成方法，在保证其基本骨架结构的基础上引入NBD‑荧光基团，最终合成NBD‑oxLig‑1，使7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷(oxLig‑1)可自发荧光，为其在细胞生物学中的示踪应用。

主权项

1.NBD‑7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷的合成方法，其特征在于：首先，以NBD‑胆固醇和壬二酸为原料，以1,3‑二环已基碳化二亚胺DCC和4‑二甲氨基吡啶DMAP作为合成反应的催化剂，二氯甲烷作为溶剂，各物质摩尔比为壬二酸：DCC：DMAP：NBD‑胆固醇＝2：1.5：1：1，应始终保证壬二酸过量，在50‑80℃充分反应，缩合成NBD‑胆固醇壬二酸酯，重结晶纯化；重结晶溶剂为下列一种或两种以上任意比例的组合：甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、水；重结晶溶剂用量为所得NBD‑胆固醇壬二酸酯质量的0.1～100倍；以上一步的NBD‑胆固醇壬二酸酯为原料，建立烯丙位氧化，以TBHP/CrO₃为氧化体系，铬酐CrO₃溶于二氯甲烷，待搅拌溶解完全后再加入一次NBD‑胆固醇壬二酸酯以及4A分子筛，然后用恒压分液漏斗滴加体积分数为70％的TBHP到反应液中室温反应20‑36h，滤去反应固体，分别用1N盐酸溶液，5％碳酸氢钠溶液，饱和氯化钠水溶液除杂，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸得到粗产物NBD‑7‑酮基胆甾醇‑9‑羧基壬烷；以摩尔数记，NBD‑胆固醇壬二酸酯：铬酐＝6～7:1，TBHP：CrO₃＝50～60:1；反应如下：