[发明专利]应用番鸭肝炎病毒制备灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明提出了一种应用番鸭肝炎病毒GS14株制备番鸭肝炎病毒重组鸡集落刺激因子佐剂灭活疫苗的制备方法。它以番鸭肝炎病毒GS14株为免疫原，以重组鸡集落刺激因子为佐剂制得疫苗。番鸭肝炎病毒GS14株，于2016年4月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC No:V201623。本发明的有益效果是该疫苗在使用时可肌肉或皮下注射，疫苗吸收快，无肉芽肿形成，对雏番鸭基本无应激反应，与蜂胶、油佐剂疫苗比较具有更好的安全性。用于预防，保护率90％以上，保护期长达3个月。且疫苗中作为免疫佐剂的重组鸡集落刺激因子有刺激机体免疫细胞发育作用，能非特异性增强机体免疫功能。

主权项

一种应用番鸭肝炎病毒GS14株制备番鸭肝炎病毒重组鸡集落刺激因子佐剂灭活疫苗的制备方法,其特征在于：它以番鸭肝炎病毒GS14株为免疫原，以重组鸡集落刺激因子为佐剂，其具体步骤如下：(1)制备抗原：将番鸭肝炎病毒GS14株毒种用生理盐水5000～10000倍稀释，经尿囊腔接种11～12日龄易感番鸭胚，0.1～0.2ml/胚，收集接种60～168小时死亡番鸭胚尿囊液，无菌检验合格，即为抗原，然后于‑20～‑40℃保存；(2)抗原灭活：将步骤(1)中的抗原加入体积终浓度为0.1％的甲醛溶液，在37℃下灭活24小时，期间振摇4次，每次3分钟；所述甲醛溶液中甲醛的含量为36～40％；(3)将步骤(2)中灭活后的抗原加入重组鸡集落刺激因子并补充注射用水，使重组鸡集落刺激因子为1μg/ml～2μg/ml、抗原灭活前的病毒含量为10^‑6.0ELD₅₀/0.2ml～10^‑5.0ELD₅₀/0.2ml，分装，然后‑4℃保存；所述番鸭肝炎病毒GS14株的保藏编号为CCTCC No:V201623。