[发明专利]一种筛选具有调节斑马鱼胃肠动力活性化合物的方法

摘要

本发明涉及一种筛选具有调节斑马鱼胃肠动力活性化合物的方法。该方法包括胚胎准备、药物处理、活体标记、实验结果影像采集和结果分析及统计。本发明首次利用钙黄绿素作为荧光标记物对斑马鱼胃肠道进行标记，通过对斑马鱼胃肠道蠕动次数进行统计分析，进行胃肠道活性药物的筛选；通过对相关条件的优化，获得了稳定可靠、成功率高和重复性好的筛选方法；对高通量筛选调节胃肠动力化合物具有重要意义。

主权项

1.一种筛选具有调节斑马鱼胃肠动力活性化合物的方法，其特征在于，步骤如下：（1）将斑马鱼受精卵置于培养容器中的胚胎培养水中，孵育108～132小时，挑选健康的斑马鱼胚胎，随机分组为受试组、阳性对照组和溶剂对照组；（2）向受试组斑马鱼胚胎的胚胎培养水中加入溶解于溶剂中的待筛选药物，向阳性对照组斑马鱼胚胎的胚胎培养水中加入阳性对照药物，向溶剂对照组斑马鱼胚胎的胚胎培养水中加入溶剂，继续孵育20～28小时；（3）吸除受试组、阳性对照组和溶剂对照组中的液体，加入质量浓度为0.2%的钙黄绿素溶液，25℃标记10min，吸除液体，胚胎培养水清洗；（4）将受试组、阳性对照组和溶剂对照组的斑马鱼胚胎进行麻醉，利用图像采集工具，对斑马鱼胚胎中显示黄绿荧光的胃肠道部分进行影像采集，得到受试组斑马鱼胚胎、阳性对照组斑马鱼胚胎和溶剂对照组斑马鱼胚胎的胃肠道蠕动影像；（5）根据步骤（4）采集的影像，分别在相同时间内对受试组、阳性对照组和溶剂对照组的斑马鱼胚胎的胃肠道蠕动次数进行计数，并利用T检验对斑马鱼胃肠道的蠕动能力进行统计学分析；当受试组的胃肠道蠕动次数高于溶剂对照组，且T检验结果显示P≤0.05，则差异显著，待筛选药物具有显著促进胃肠道蠕动的作用；当受试组的胃肠道蠕动次数高于溶剂对照组，且T检验结果显示P≤0.01，则差异非常显著，待筛选药物具有非常显著促进胃肠道蠕动的作用；当受试组的胃肠道蠕动次数低于溶剂对照组，且T检验结果显示P≤0.05，则差异显著，待筛选药物具有显著抑制胃肠道蠕动的作用；当受试组的胃肠道蠕动次数低于溶剂对照组，且T检验结果显示P≤0.01，则差异非常显著，待筛选药物具有非常显著抑制胃肠道蠕动的作用；当受试组与溶剂对照组的胃肠道蠕动次数经T检验后，结果显示P>0.05，则统计学上差异不显著，待筛选药物对胃肠道蠕动没有作用。