[发明专利]一种角蛋白酶的分离纯化方法及应用

摘要

本发明涉及一种角蛋白酶的分离纯化方法及应用，步骤为：将粗酶液用硫酸铵梯度沉淀后，用缓冲液重悬沉淀、透析；用缓冲液平衡离子交换柱，上样，酶活峰在穿过峰中；收集有酶活的组分，用缓冲液透析；用缓冲液平衡离子交换柱，上样，用NaCl梯度洗脱，得纯化后的角蛋白酶。本发明中1L发酵液可收获角蛋白酶Ker FJ纯酶16.59mg，总酶活2989U。且获得的角蛋白酶Ker FJ在畜禽废弃物降解、脱毛及作为洗涤剂添加剂方面均有非常好的效果。

主权项

一种角蛋白酶的分离纯化方法，步骤如下：将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis FJ‑3‑16发酵培养，获得粗酶液，用质量分数为40～70％的硫酸铵梯度沉淀粗酶液后，用pH 10.0，50mM Tris‑HCl缓冲液重悬沉淀、透析；用pH 10.0，50mM Tris‑HCl缓冲液平衡Q Sepharose fast‑flow离子交换柱，上样，酶活峰在穿过峰中；收集有酶活的组分，用pH 7.0，50mM Tris‑HCl缓冲液透析；用pH 7.0，50mM Tris‑HCl缓冲液平衡SP Sepharose fast‑flow离子交换柱，上样，用0～1M NaCl梯度洗脱，在0.25M NaCl处洗脱出有酶活的组分，即得纯化后的角蛋白酶Ker FJ；所述枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis FJ‑3‑16于2016年01月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号CGMCC NO.12086，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Bacillus subtilis；所述粗酶液的发酵培养基为：FM3培养基(g·L^‑1)：玉米粉20，大豆粉20，麸皮10，KH₂PO₄ 1，K₂HPO₄ 3，CaCl₂ 1，pH 7.5。