[发明专利]家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201610290166.0 | 申请日： | 2016-05-04 |
| 公开（公告）号： | CN106399363B | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 钟伯雄;张玉玉;叶露鹏 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/66 |
| 代理公司： | 33200 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 林超 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用。获得丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、His 6序列、DDDDK、丝素轻链蛋白信号肽、丝素轻链基因3’末端序列、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40的3’末端序列，然后再顺序连接构建成质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40序列，第二表达框包括丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列，且在DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列之间含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建donor质粒的工作量，提高了家蚕丝腺生物反应器工作效率，提高了外源蛋白的表达量。 | ||
| 搜索关键词： | 家蚕 中部 生物反应器 启动子 通用型 质粒 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒，其特征在于：/n所述的质粒为pBac[A3-EGFP-SV40]-[Ser1 promoter-18s rRNA-promoter-FLSP-His6-DDDDK-FLPA]，是以piggyBac转座子为基础并带有Amp抗性基因，包括piggyBac转座子的两个转座臂PBL和PBR，以及两个转座臂之间的两个功能表达框；/n一个功能表达框是A3启动子启动的绿色荧光蛋白基因表达框，即A3 Promoter–EGFP-SV40，另一个功能表达框是包含家蚕丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA启动子、丝素蛋白轻链基因信号肽、六聚组氨酸、肠激酶酶切位点和家蚕丝素蛋白轻链基因3’末端序列的表达框，即Ser1 Promoter-18s rRNA promoter-Fibroin L chain signal peptide-His 6-DDDDK-Fibroin L chain PolyA；/n所述的DDDDK-FLPA之间含有专一性的ApaI和NheI的两个酶切位点，两个酶切位点用于将质粒特异性切开连接外源基因后形成有功能的质粒。/n
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