[发明专利]湖泊藻类中有机磷提取及组成分析方法

摘要

本发明公开了一种湖泊藻类中有机磷提取方法，包括样品采集、磷的基本组成测定、有机磷(P_o)的提取、样品测试预处理、液态磷核磁(³¹P‑NMR)分析和计算步骤。本发明采用0.5mol/L NaOH+25mmol/L EDTA提取剂，藻类粉末样品与提取剂的固液比为1：60获得最优的P_o提取效果；³¹P‑NMR分析测试过程中，设置延迟时间(D₁)为5s，扫描分析时间为15h可获得较好的谱图。本发明的藻类P_o提取方法，总磷(TP)和P_o的平均提取率分别在95.0％和94.9％以上，能准确检测出样品中P_o的具体种类及含量，真实准确的反映湖泊中藻类P_o的组成结构特征。为研究湖泊藻类在水华暴发过程中所做的贡献以及湖泊内源磷循环过程及其对政府决策具有重要科学依据。

主权项

一种湖泊藻类中有机磷提取方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品采集：采集富营养化湖泊水体表层漂浮藻类，装入密封袋冷藏保存，运回实验室进行冷冻干燥，冷干后充分研磨，过2mm筛，得到藻类粉末样品，‑20℃冷冻保存备用；(2)磷的基本组成测定：取藻类粉末样品两份，一份于马弗炉中煅烧，样品降至室温后加入HCl振荡，离心分离后分析其中磷浓度，即总磷TP含量；另一份样品置于离心管中，加入HCl振荡，离心后测定磷浓度，即无机磷P_i含量；藻类中有机磷P_o的含量由TP和P_i相减得到；(3)P_o的提取：取藻类粉末样品加入提取剂，室温下振荡、离心后，留取上清液，冷冻干燥形成粉末样品，冷冻保存备用；(4)样品测试预处理：将步骤(3)得到的粉末样品用NaOH溶解，离心，加入D₂O锁定信号；(5)³¹P‑NMR分析：采用BRUKER标准腔5mm BBO探头，³¹P的共振频率为161.98Hz，测定温度为20℃，谱峰宽度为5Hz，获取时间AQ为0.2102s；(6)计算：通过步骤(5)中得到的波谱进行积分及对各磷组分进行定性分析，并根据步骤(2)得到的TP含量计算藻类中各磷组分的含量。