[发明专利]一种规模化生产普伐他汀的工艺

摘要

本发明公开了一种规模化生产普伐他汀的工艺，其包括发酵、提取和精制步骤，其中发酵工艺中使用由冬瓜皮水提取液和西瓜皮水提取液组成的植物提取液，有效提高微生物对底物康百汀的耐药性和转化能力以及普伐他汀发酵水平，从而增加普伐他汀产量，在提取和精制步骤中，严格控制溶液的pH值、有机溶剂的种类与用量、萃取时间和温度以及降温操作和结晶时间，保证普伐他汀的收率与纯度。本发明工艺稳定，成本低廉，实现了普伐他汀的规模化、工业化生产。

主权项

一种规模化生产普伐他汀的工艺，其特征在于，包括以下步骤：S1、发酵：A1.种子培养：按照如下配方配制种子培养基：葡萄糖24～26g/L、酵母提取物20～22g/L、大豆蛋白胨6～8g/L、K2HPO4·3H2O 1～2g/L、MgSO4·7H2O 0.5～1g/L和消沫剂1.0g/L，调节pH7.0～7.2；向种子培养基中接种马杜拉放线菌，接种后在33～35℃下培养48～72小时，得到种子液；A2.发酵培养：按照如下配方配制发酵培养基：葡萄糖56～60g/L、酵母提取物20～24g/L、大豆蛋白胨6～8g/L、K2HPO4·3H2O 1～2g/L、MgSO4·7H2O 0.5～1g/L、(NH4)2SO41～2g/L、植物提取液4～8ml/L和消沫剂1.0g/L，调节pH7.0～7.2；向发酵培养基中接种A1得到的种子液，接种后先在33～35℃下增殖培养30～40小时，然后加入康百汀溶液，在33～35℃下培养72～156小时，培养过程控制康百汀在发酵液中的浓度为0.7～0.9g/L，发酵培养结束后得到发酵液；S2、提取：B1.调节S1所得发酵液的pH至2～5，加入硅藻土后过滤，收集滤饼，往滤饼中加入滤饼重量6～10倍量的有机溶剂一，在90～120℃下萃取3～5h，萃取结束过滤，得到滤液，滤液在40～80℃下真空浓缩至浓缩液的体积为滤液体积的1/6～1/3，得到浓缩液；B2.往B1得到的浓缩液中加入活性炭，搅拌1～2h，过滤并洗涤，滤液在40～80℃下真空浓缩至浓缩液的体积为滤液体积的1/6～1/3，得到浓缩液；B3.将B2得到的浓缩液降温至5～10℃，并保温结晶6～10h，过滤得到湿晶体，湿晶体在60～70℃下干燥至干燥失重≤1％，得到粗品；B4.往B3得到的粗品加入粗品重量6～8倍量的有机溶剂二，升温溶解，溶解液降温至5～10℃，并保温结晶6～10h，过滤得到湿晶体，湿晶体在60～70℃下干燥至干燥失重≤1％，得到中间体；S3、精制：往S2得到的中间体加入中间体重量4～8倍量的有机溶剂三，升温溶解，然后调节溶解液pH至9～11，溶解液降温至5～10℃，并保温结晶6～10h，过滤得到湿晶体，湿晶体在60～70℃下干燥至干燥失重≤1％，得到普伐他汀；所述植物提取液为冬瓜皮提取液和西瓜皮提取液的组合物，所述冬瓜皮提取液和西瓜皮提取液的体积比为(3～5):1；所述有机溶剂一为甲苯、乙酸乙酯或乙酸丁酯；所述有机溶剂二为甲醇、乙醇或丁醇；所述有机溶剂三为乙醇和水的混合液，其中水占混合液重量的5％；或为丁醇和水的混合液，其中水占混合液重量的6％；或为乙醇和水的混合液，其中水占混合液重量的6％。