[发明专利]一种具鞘微鞘藻胞内多糖的提取方法

摘要

本发明公开了一种具鞘微鞘藻胞内多糖的提取方法，步骤是：（1）将具鞘微鞘藻经规模化培养后收集藻液，过滤藻液获得藻片，风干；（2）将藻片进行粉碎，得到藻粉；（3）将藻粉与无菌水混合，得到提取液；（4）将多糖提取液浓缩，得到多糖浓缩液；（5）以三氯乙酸溶液沉淀蛋白质，离心，取上清液；（6）用乙醇沉淀多糖，放置过夜，离心，留沉淀，将醇沉粗多糖溶于蒸馏水中，流水透析，收集多糖（高分子量）；（7）将透析后的透析液加入乙醇；（8）将沉淀相中乙醇挥发干，制得多糖，冷冻干燥。方法操作简便、成本低廉、设备简单、提取率高、产品纯度好，安全可靠,达到多级分离提取的效果，适用于工业化规模生产。

主权项

一种具鞘微鞘藻胞内多糖的提取方法，其步骤是：（1）首先进行具鞘微鞘藻的大量培养：采用BG‑11液体培养基作为培养基质，其组分如下：硝酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钙、柠檬酸、柠檬酸铁铵、乙二胺四乙酸二钠盐、碳酸钠以及微量元素A5溶液，将以上成分按比例配制成培养基，将具鞘微鞘藻分别通过Ⅰ级藻种培养、Ⅱ级藻种培养和Ⅲ级藻种扩大培养进行藻种的逐级扩培，将扩培的Ⅲ级藻种转接到光生物反应器或跑道式循环池进行规模化培养,在以上藻种的各级培养中，培养条件为：温度26‑30℃、光强3000Lux‑4000Lux、连续通气培养15‑30d,经检测后，培养液中藻体生物量达到叶绿素a含量为8‑10μg /毫升，收集藻培养液，备用；（2）将收集的具鞘微鞘藻培养液用200‑500目绢布过滤藻液，得到具鞘微鞘藻藻泥，在自然状态下将藻泥风干，得到具鞘微鞘藻藻片，将干燥的具鞘微鞘藻藻片粉碎、过筛，得到具鞘微鞘藻藻粉，藻粉细度为80‑100目；（3）取具鞘微鞘藻藻粉，将藻粉与无菌水以1:8‑1:10比例混合，水浴加热2‑4小时，水浴加热温度控制在90‑98℃，2‑3层纱布过滤，取上清液；残渣按上述方法再提取至少2‑3次，每次1.5‑2.5小时，将提取的上清液合并，得到多糖提取液，4℃保存,上述的水浴加热处理前，藻粉需与无菌水混合放置12‑24小时；（4）采用旋转蒸发仪在30‑45℃下将多糖提取液浓缩至原体积的1/4‑1/6，得到多糖浓缩液，4℃保存；（5）以4℃三氯乙酸溶液沉淀蛋白质，使三氯乙酸含量达到总体积的4‑5%，4℃放置3‑4小时，4℃离心20‑25分钟，取上清液，相同条件下重复3‑5次，至考马斯亮蓝检测无蛋白质被测出；所述的离心提取的速度为3500‑3700转/分钟；（6）用乙醇沉淀多糖，4℃放置过夜，4℃离心20‑25分钟，留沉淀，将醇沉粗多糖充分溶于蒸馏水中，利用透析袋将具鞘微鞘藻胞内多糖提取液进行流水透析，收集分子量3500道尔顿以上的多糖组分；（7）将透析后的透析液加入3倍体积的乙醇，4℃放置过夜，4℃离心20‑25分钟，取沉淀相；（8）室温下将沉淀相中乙醇挥发干，将多糖冷冻干燥，得到具鞘微鞘藻胞内多糖。