[发明专利]一种从成年猕猴周围神经中分离、纯化雪旺细胞的方法

摘要

本发明涉及细胞生物学领域，公开了一种从成年猕猴周围神经中分离、纯化雪旺细胞的方法，包括下述步骤：第一步，神经的获取及体外预变性：无菌情况下取成年猕猴腓肠和腓总神经段，去除神经外膜，采用含有复合因子的SCCM预变培养基培养获得成年猕猴腓肠神经；第二步，细胞的原代培养：NB4和dispase混合消化神经，离心后，重悬于含有SCCM的laminin的培养皿中，孵育；第三步，雪旺细胞的纯化：将细胞孵育后，加入dispase消化后收集细胞悬液，在含有Ara‑C纯化培养液进行孵育；然后纯化、离心后种植在含有SCCM的生长培养基中。预变性时加入细胞增殖因子提高细胞产量，缩短纯化时间，获得高纯度的成年动物雪旺细胞。

主权项

一种从成年猕猴周围神经中分离、纯化雪旺细胞的方法，其特征是，包括下述步骤：第一步，神经的获取及体外预变性：无菌情况下取成年猕猴腓总神经段，去除神经外膜，分成合适大小组织块后分别采用SCCM预变培养基进行培养获得成年猕猴腓肠神经；第二步，细胞的原代培养：按物质的量1:1混合的复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经1～1.5h，离心后，重悬于含有SCCM的laminin的培养皿中，5％二氧化碳，37℃培养箱中孵育；第三步，将第二步得到的细胞孵育后，加入dispase消化液消化，水平方向反复拍打使雪旺细胞游离入消化液，收集细胞悬液离心，弃上清，重悬至含有Ara‑C纯化培养液进行细胞孵育24h；然后再次纯化后，将获得的雪旺细胞种植在含有SCCM的生长培养基中。