[发明专利]一种检测细菌性脑膜炎病原体的多重PCR试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测细菌性脑膜炎病原体的多重PCR试剂盒，能够快速检测六种细菌性脑膜炎病原体，肺炎链球菌（SP）、无乳链球菌（GBS）、流感嗜血杆菌（HI）、单核细胞增生李斯特菌（LM）、金黄色葡萄球菌（SA）、脑膜炎奈瑟菌（NM）；本发明公开的“公共引物”介导的多重PCR方法，具体包括构建质粒模板、筛选公共引物、设计多重引物、多重PCR体系检测；结合两步退火温度法提高多重PCR体系的特异性、敏感性和检测通量，该多重PCR方法具有一定的包容性，可继续增加检测靶标，有利于提高多重PCR的检测通量。本发明能有效检测六种常见细菌，具有灵敏度高，经济、快速、操作简单等优点，利于应用临床诊断。

主权项

1.一种检测细菌性脑膜炎病原体的多重PCR试剂盒，包括公共引物、针对细菌性脑膜炎病原体的嵌合引物对，还包括Taq 聚合酶、dNTP、MgCl₂、PCR缓冲液、去离子水、阳性对照引物对；所述公共引物的序列为SEQ ID NO.1；所述针对细菌性脑膜炎病原体的嵌合引物对如下核苷酸序列所示：进行PCR反应时，采用两步退火温度法，第一步退火温度高于第二步退火温度8～10 ℃；进行PCR反应时，针对细菌性脑膜炎感染病原体的每条嵌合引物的终浓度为10nM；进行PCR反应时，公共引物的终浓度为2000nM。