[发明专利]一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法有效
| 申请号： | 201610297439.4 | 申请日： | 2016-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN105838801B | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 毛红菊;程祖乐;王琨;夏文薇;金庆辉;赵建龙 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 200050 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法，包括：(1)制备微柱阵列芯片；(2)抽取表面修饰链霉亲和素的聚苯乙烯微球，稀释后分步加入到目标磁珠的悬浊液中孵育，富集微球磁珠复合物，重悬；(3)取步骤(2)中的微球磁珠复合物的重悬液，通入到装置中冲洗，通过统计芯片上截留的微球磁珠复合物，得到目标磁珠的个数，从而达到对核酸高灵敏定量的目的。本发明芯片组装简单，成本低；在保留了BEAMing实验高灵敏度特点的同时使得BEAMing技术的目标磁珠计数方法更加方便易行，为核酸的高灵敏检测提供了一个简便、快速的实用工具。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 阵列 芯片 数字 pcr 定量 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于微球和微柱阵列芯片的乳滴数字PCR定量方法，包括：(1)选用直径为2.8μm的表面修饰有SA的Dynabeads M‑270磁珠作为扩增反应的固相载体，并与过量的带双生物素基团的引物1饱和结合；BEAMing实验的预混液中的带生物素的引物2参与靶标分子的扩增使目标磁珠上带上生物素；其中，引物1为5’‑dualbiotin‑(PEG18‑spacer)‑t‑gagtttctcttagtgtgtgtgagtatgtgacggag；引物2为5’‑biotin‑cacacgccgacttcaggtt；(2)抽取表面修饰链霉亲和素的聚苯乙烯微球，稀释后分步加入到BEAMing实验中生物素修饰的目标磁珠的悬浊液中孵育，富集微球磁珠复合物，重悬；(3)取步骤(2)中的微球磁珠复合物的重悬液，通入到微柱阵列芯片中冲洗，通过统计芯片上截留的微球磁珠复合物，得到目标磁珠的个数。
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