[发明专利]三磷酸腺苷的纯度检测方法

摘要

本发明公开了一种三磷酸腺苷的纯度检测方法。该检测方法包括下述步骤对ATP标准物质中的水分进行定量检测得到水分含量，对ATP标准物质中的无机杂质进行定量检测得到无机杂质含量，用高效液相色谱检测ATP，并用面积归一化法计算ATP含量，然后通过下述公式计算出ATP标准物质中三磷酸腺苷的纯度三磷酸腺苷的纯度＝(100％‑水分含量‑无机杂质含量)×ATP含量。本发明的检测方法更为精确可靠，能够精确、稳定地测定ATP标准物质的纯度，应用于细菌快速检测领域，保证相关仪器的校准、检测方法验证和检测结果的质量控制，助推方法标准化工作。

主权项

一种三磷酸腺苷的纯度检测方法，其特征在于，包括下述步骤：对ATP标准物质中的水分进行定量检测得到水分含量，对ATP标准物质中的无机杂质进行定量检测得到无机杂质含量，用高效液相色谱检测ATP，并用面积归一化法计算ATP含量，然后通过下述公式计算出ATP标准物质中三磷酸腺苷的纯度：三磷酸腺苷的纯度＝(100％‑水分含量‑无机杂质含量)×ATP含量；所述的ATP标准物质由ATP原料经纯化步骤得到，所述的纯化步骤包括如下：(1)中压制备色谱条件：中压制备色谱柱的规格为10μm，30*250mm，柱温为3～8℃，洗脱溶剂为甲醇‑0.2mol/L磷酸盐缓冲液，体积比为15:85，流速40～50ml/min；进样为40～50mg/ml的ATP二钠水溶液，检测波长259nm，运行时间为20min；所述中压制备色谱柱为YMC C18柱；(2)样品纯化调节柱温为3～8℃，用体积百分比浓度为15％的甲醇水溶液冲洗中压制备色谱柱后，再用步骤(1)中的洗脱溶剂平衡制备柱，将ATP原料形成的40～50mg/ml水溶液注入中压制备分离系统，收集峰高1500mV以上洗脱液，冷冻避光保存；(3)Na+平衡和脱盐用体积百分比浓度为15％甲醇水溶液洗去色谱柱中缓冲盐，调节柱温为5℃，再用体积百分比浓度为8％甲醇水溶液平衡中压制备分离系统，将冷冻保存的洗脱溶液全部注入中压制备分离系统，用体积百分比浓度为8％甲醇‑pH为6.0磷酸钠缓冲溶液进行钠离子平衡，至洗脱液的pH为6.0，再用体积百分比浓度为8％甲醇水溶液洗涤去除缓冲盐离子，再用甲醇洗脱，收集峰高1500mV以上洗脱液；(4)样品干燥蒸馏去除甲醇，冷冻干燥，即得三磷酸腺苷标准物质。