[发明专利]美洲黑杨自由授粉F1代优秀单株叶片再生植株的生产方法

摘要

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种美洲黑杨自由授粉F1代优良单株叶片再生根的生产方法。本发明所述美洲黑杨自由授粉F1代优良单株叶片再生植株的生产方法由外植体的选择与消毒，愈伤组织的诱导，不定芽的诱导和根的诱导组成。本发明培养周期短，变异少，培养条件可以人为控制，操作方法简单，为美洲黑杨自由授粉F1代优良单株作为优秀的科研材料进行遗传转化和品种改良等研究奠定基础,从而为杨树人工林大面积生产提供耐盐碱地的优良品种。

主权项

一种美洲黑杨自由授粉F1代优良单株叶片再生植株的生产方法，其特征是由以下步骤构成：(1)外植体的选择与消毒选择生长健壮无病害的美洲黑杨自由授粉F1代优良单株的幼嫩叶片作为外植体，将材料经流水冲洗0.5‑1h，去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用灭菌的无菌水冲洗3‑5遍，再用75％无水乙醇消毒30s，接着用灭菌的无菌水冲洗1‑2遍，然后用0.1％氯化汞消毒处理5‑8min，最后用无菌水冲洗3‑4遍；(2)愈伤组织的诱导在超净工作台上，将消毒好的叶片切成5mm大小的方块，接种于诱导愈伤培养基上，培养基的配方为：MS+0.5mg/L 6‑BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂；Ph调为5.8‑6.0，叶的背面紧贴培养基，每瓶接种3‑4块，诱导光照条件12h/d，光照强度2000lux，温度23‑28℃；(3)不定芽的诱导将经过继代培养2‑3次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上，培养基的配方为：MS+0.5mg/L 6‑BA+0.15mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂；Ph调为5.8‑6.0，诱导光照条件12h/d，光照强度约2000lux，温度23‑28℃；(4)根的诱导经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4‑8片叶子，长度0.8‑1.2cm高时转入生根培养基诱导生根，培养基的配方为：1/2MS+0.6mg/L IBA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂；Ph调为5.8‑6.0，诱导光照条件12h/d，光照强度2000lux，温度23‑28℃。