[发明专利]一种中压制备色谱快速分离纯化茶籽皂甙的方法

摘要

本发明涉及茶籽中茶皂甙纯化制备方法，属于中压制备色谱方法。其包括：（1）茶籽皂甙提取物制备；（2）中压制备柱填装与活化；（3）分离样品的制备；（4）分离溶剂系统；(5)监视及分馏收集。本发明突破了茶籽皂甙单体纯化制备难度大，实现了整个分离过程计算机自动控制及在线监测，具有快速分离、产物纯度高、效率高成本低等特点。在110分钟内分离得到了4种茶籽皂甙成分，能进行茶籽皂甙成分大规模制备，一次上样量可达3克，茶籽皂甙纯度达到95.7%以上，为茶籽资源的深度开发提供重要方法手段。

主权项

一种中压制备色谱快速分离纯化茶籽皂甙的方法，其特征在于包括以下步骤：1）茶籽皂甙提取物制备：将采摘的茶果去皮去壳后进行烘干、粉碎和脱脂；脱脂茶籽粉用极性溶剂回流提取，提取液抽滤后，真空浓缩回收溶剂，冷冻干燥得到茶籽皂甙粗提物；2）中压制备柱填装：将反相C18材料采用干法装柱，装于耐压玻璃柱，将填料放入自动装柱器中，氮气加压15～30分钟直至柱子中的填料不再下降，柱两端用脱脂棉栓和筛板压紧螺栓固定；3）中压色谱制备柱活化：流动相超声脱气20～30分钟后，以较高流速冲洗柱30分钟后，以较低流速用不同极性流动相活化分离柱 2小时以上；4）分离样品的制备：将茶籽皂甙粗提物用1～10倍体积流动相溶解， 8000转/分钟离心后上清液作分离样品；5）分离溶剂系统：分别以水：甲醇为溶剂系统，梯度洗脱110分钟，即以流速为10‑50ml/min, A相为纯水、B相为甲醇，洗脱梯度为线性梯度：0～20minB% 15‑30%，20～50minB% 30‑45%，50～65minB% 45‑78%，60～95minB% 78‑85%，95～100minB% 85‑100%，100‑110minB% 100%；6）监视及分馏收集：在220nm波长下监视，自动分馏收集器按出峰时间收集相应吸收峰的洗脱液；7）纯化洗脱液的浓缩干燥：将每个组分液脱液在真空度90‑150mbar，温度为50℃下减压浓缩，除去甲醇，待浓缩样冷却至室温，上冷冻干燥机将浓缩组分冻干。