[发明专利]一种纤维素降解菌群的宏基因组的提取方法

摘要

本发明公开了一种纤维素降解菌群的宏基因组的提取方法。本发明提供了一种纤维素降解菌群宏基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：对纤维素分解菌群依次进行菌体破壁、有机溶液抽提DNA、异戊醇沉淀DNA和溶解DNA，得到宏基因组DNA；本发明的实验证明，本发明通过在提取前采用高盐溶液进行洗脱，并通过加入溶菌酶和机械匀浆强化细胞破壁，并通过蛋白酶K破壁，不仅使微生物细胞壁更易破碎，DNA分子更易释放，同时有效保证了过程的可重复性，进而保证了提取的宏基因组DNA片段完整性、纯度和菌群结构完整性。本发明为天然纤维素利用菌群的研究和应用,以及微生物分子生态学研究提供了有效的技术支撑。

主权项

1.一种纤维素降解菌群宏基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：对纤维素分解菌群依次进行菌体破壁、有机溶液抽提DNA、异戊醇沉淀DNA和溶解DNA，得到宏基因组DNA；所述纤维素降解菌群的菌体为将纤维素降解菌群10%接种量接种在菌群富集培养基，置于50℃静置培养3天后，收集发酵产物中的沉淀即为纤维素降解菌群的菌体；所述纤维素降解菌群为稳定降解木质纤维素原料的天然纤维素降解菌群；稳定降解木质纤维素原料的天然纤维素降解菌群为将木质纤维素原料和菌群在菌群富集培养基中发酵3天，检测每天木质纤维素原料降解率，若3天木质纤维素原料降解率基本不变，为稳定降解木质纤维素原料的天然纤维素降解菌群；所述菌体破壁包括如下步骤：（1）将所述纤维素分解菌群的菌体用高盐溶液进行高盐洗涤，收集高盐洗涤后菌体；所述高盐溶液为浓度大于等于75.5g/l的KCl水溶液；所述高盐洗涤为将所述纤维素分解菌群的菌体与所述高盐溶液混匀，离心收集沉淀，得到洗涤后菌体；离心的条件为14000 g离心10 min‑30 min；（2）将所述高盐洗涤后菌体用溶菌酶裂解，得到溶菌酶裂解后产物；（3）将所述溶菌酶裂解后产物用蛋白酶K酶解，得到蛋白酶K酶解后产物；（4）匀浆所述蛋白酶K酶解后产物，收集匀浆产物的上清液。