[发明专利]一种基于高通量测序的线粒体基因组文库及其构建方法

摘要

本发明涉及一种基于高通量测序的线粒体基因组文库及其构建方法。所述构建方法包括以下步骤S1、自总DNA中一步PCR扩增线粒体全长DNA；S2、将线粒体全长DNA打碎，得到DNA片段；S3、对DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA片段；S4、在平末端DNA片段3’端加A，得到加A的DNA片段；S5、在加A的DNA片段的3’端加接头，得到加接头的DNA片段；S6、对加接头的DNA片段进行前LM‑PCR；S7、对LM‑PCR产物进行后PCR。本发明线粒体基因组文库构建方法通过自总DNA中一步PCR扩增得到线粒体全长DNA，可以保障人类线粒体基因组的精确扩增，不被在人类基因组的同源序列污染混合使突变检测更灵敏和准确。

主权项

一种基于高通量测序的线粒体基因组文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、自总DNA中一步PCR扩增线粒体全长DNA；S1中所用引物对的具体序列为Primer F:ccgcacaagagtgctactctcctc，Primer R:gatattgatttcacggaggatggtg；所述步骤S1中PCR反应体系如下：所述步骤S1中PCR反应的程序如下：Lid：105℃，Wait，Auto；Block：95℃，2min；95℃，20sec；68℃，18min；30cycles；72℃，20min；4℃，hold；S2、将线粒体全长DNA打碎，得到DNA片段；S3、对DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA片段；S4、在平末端DNA片段3’端加A，得到加A的DNA片段；S5、在加A的DNA片段的3’端加接头，得到加接头的DNA片段；S6、对加接头的DNA片段进行前LM‑PCR；前LM‑PCR的反应体系如下：前LM‑PCR的反应条件如下：98℃45sec；98℃15sec，60℃30sec，72℃30sec，9cycles；72℃1min；4℃；S7、对LM‑PCR产物进行后PCR；后PCR反应的体系如下：后PCR反应的条件如下：98℃45sec；98℃15sec，60℃30sec，72℃30sec，14cycles；72℃1min；4℃。