[发明专利]人外周血单个核细胞内乙酰胆碱含量的检测方法

摘要

本发明提供了一种人外周血单个核细胞内乙酰胆碱含量的检测方法，该方法以超高效液相色谱技术从待测样品中分离ACh成分，从而为准确检测ACh含量奠定了基础。该技术方案以实验手段发现HILIC柱更适于极性化合物的分离，可有效分离ACh与iso‑ACh，且对Cho也具有较好的分离效果，在此基础上进一步设计了色谱条件及内标物类别，以同位素的d9‑ACh同时作为ACh和iso‑ACh的内标物，可最大限度地减少因样品损失造成的分析误差，有效保证了测定结果的准确性。在利用UPLC有效分离ACh的基础上，本发明以液质联用系统执行ACh信号检测，通过质谱条件的优化实现了对ACh的准确定量，所得结果稳定准确，线性及灵敏性良好，同时具有较低的检出限和较高的回收率，应用前景广阔。

主权项

一种人外周血单个核细胞内乙酰胆碱含量的检测方法，该方法利用超高效液相色谱分离待测样品中的乙酰胆碱，而后对分离出的乙酰胆碱进行定量；所述利用超高效液相色谱分离待测样品中的乙酰胆碱，包括以下步骤：1)提取人外周血单个核细胞；2)向步骤1)提取得到的人外周血单个核细胞中加入含有0.01～1％(v/v)甲酸的去离子水溶液，混匀，而后加入含有ACh的内标物、iso‑ACh的内标物、Cho的内标物的乙腈溶液，混匀，固液分离取上清；3)取步骤2)所述上清液，向超高效液相色谱仪中进样检测；其中柱温为40～50℃，流速为0.2～0.8mL/min，而后以甲酸铵的水溶液和乙腈为流动相进行线性洗脱。