[发明专利]一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用有效
| 申请号： | 201610312917.4 | 申请日： | 2016-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN105816871B | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 徐黎明;赵景壮;卢彤岩;刘淼;曹永生 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 |
| 主分类号： | A61K39/205 | 分类号： | A61K39/205;A61K48/00;C12N15/47;C12N15/11;C12N15/85;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京市诚辉律师事务所 11430 | 代理人： | 郎坚 |
| 地址： | 154400 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗及其应用，所述中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗的制备方法包括以下步骤：(1)设计扩增J基因型传染性造血器官坏死病毒表面糖蛋白(Glycoprotein，G)基因的特异性引物；(2)利用病毒敏感细胞系培养IHN病毒分离株，然后提取病毒基因组RNA；(3)采用步骤(1)所得引物对步骤(2)所得的病毒基因组RNA进行一步法RT‑PCR扩增；(4)将步骤(3)所得的回收产物与pMD19‑T simple载体连接，将连接产物转化DH5α感受态细胞，挑取单菌落，扩大培养后提取质粒进行PCR鉴定，将鉴定正确的质粒进行测序；(5)将步骤(4)鉴定正确的IHNV病毒分离株糖蛋白基因利用BamH I和Xho I酶切位点克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，构建核酸疫苗。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 中国 虹鳟 传染性 造血 器官 坏死 核酸 疫苗 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种中国虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗的制备方法，其包括以下步骤：(1)设计扩增J基因型传染性造血器官坏死病毒(IHNV)表面糖蛋白G基因的特异性引物F1和F2；其中F1 5'TTGAGACCGAACGCAACTCGCAGAG 3'SEQ ID No.1F2 5'CTGTCTGGTGGTGAGGAAGTGAAGA 3'SEQ ID No.2(2)扩增IHNV病毒分离株HLJ‑15，然后提取病毒基因组RNA；(3)采用步骤(1)所得引物对步骤(2)所得的病毒基因组RNA利用TAKARA生物公司的one step RT‑PCR kit进行一步法RT‑PCR扩增，将RT‑PCR扩增产物经电泳后进行产物回收；(4)将步骤(3)所得的回收产物与pMD19‑T simple载体连接，将连接产物转化DH5α感受态细胞，挑取单菌落扩大培养后提取质粒并进行PCR鉴定，将鉴定正确的质粒进行测序；(5)将步骤(4)鉴定正确的IHNV病毒分离株糖蛋白G基因SEQ ID No.3利用BamH I和Xho I酶切位点克隆到真核表达载体pcDNA3.1上，构建核酸疫苗pHLJ‑15；其中，IHNV病毒分离株HLJ‑15的保藏编号为CCTCC No.V201622。
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