[发明专利]一种4-羟基异亮氨酸的合成方法有效
| 申请号： | 201610312942.2 | 申请日： | 2016-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN105969785B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 谢希贤;张成林;陈宁;麻杰;刘涛;徐庆阳 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/74;C12N15/77;C12N15/75;C12N1/21;C12P13/04;C12R1/15;C12R1/19;C12R1/425;C12R1/32;C12R1/125;C12R1/07;C12R1/10;C |
| 代理公司： | 12107 天津市三利专利商标代理有限公司 | 代理人： | 李蕊<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 300000 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种4‑羟基异亮氨酸的合成方法，该方法首先构建重组表达质粒，同时表达L‑异亮氨酸‑4‑羟基化酶和L‑谷氨酸氧化酶，然后在构建的催化反应体系中加入L‑谷氨酸和L‑异亮氨酸两种底物作为催化反应的前体合成4‑羟基异亮氨酸，经过4h的催化反应，L‑谷氨酸和L‑异亮氨酸的转化率分别为97.01％和98.45％。本发明使用L‑谷氨酸替代α‑酮戊二酸作为合成4‑羟基异亮氨酸的前体，能高效生产4‑羟基异亮氨酸且生产成本低，便于工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 羟基 异亮氨酸 合成 方法 | ||
【主权项】：
1.一种4-羟基异亮氨酸的合成方法，其特征在于：使用L-谷氨酸作为催化前体酶法合成4-羟基异亮氨酸，具体步骤如下：/n（1）构建包含L-异亮氨酸-4-羟基化酶和L-谷氨酸氧化酶基因重组表达载体，其中，以序列表SEQ ID NO.1和序列表SEQ ID NO.2所示序列为已知ido和lgox原始核苷酸序列，序列表SEQ ID NO.3和序列表SEQ ID NO.4所示序列为idol和lgox针对E. coli BL21（DE3)密码子优化的核苷酸序列，构建得到包含L-异亮氨酸-4-羟基化酶和L-谷氨酸氧化酶基因的重组表达载体——质粒pETduet-ido-lgox，所得质粒pETduet-ido-lgox的序列为序列表SEQ ID NO.5所示序列；/n（2）将步骤（1）中的重组表达载体转化所需菌株，获得基因工程重组菌株；/n（3）培养步骤（2）中的重组菌株，从而获得表达L-异亮氨酸-4-羟基化酶和L-谷氨酸氧化酶的菌体；/n（4）破碎步骤（3）中的菌体，获得粗酶；/n（5）将步骤（4）中获得的粗酶添加入含有L-谷氨酸和L-异亮氨酸的催化液中，利用酶法合成4-羟基异亮氨酸。/n
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