[发明专利]促进细胞分泌可溶性纤连蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种促进细胞分泌可溶性纤连蛋白的方法，用于解决现有方法细胞的均一性差的技术问题。技术方案是首先在培养瓶中加入新鲜培养基，置于37℃细胞培养箱中培养12h到24h，使细胞贴壁。再取出培养瓶，倒掉旧的培养基，用新鲜培养基注满培养瓶至溢出。用胶塞和封口膜密封培养瓶口，将培养瓶放入海绵支架中，贴壁一面朝外侧放入随机定位仪，采用随机模式回转进行培养，12h到24h后收集细胞条件培养基。本发明采用三维回转方法，使细胞培养基处于一种均一的生长环境，既能避免形成梯度从而培养基中产生一些不利因子对细胞生长产生的干扰，又能促进细胞分泌更多的可溶性纤连蛋白，以利于后期提取纯化。

主权项

一种促进细胞分泌可溶性纤连蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、在培养瓶中接种细胞密度为以2×10⁴个/cm²至2×10⁵个/cm²，加入新鲜培养基，置于37℃细胞培养箱中培养12h到24h，使细胞贴壁；步骤二、取出培养瓶，倒掉旧的培养基，用新鲜培养基注满培养瓶，用镊子柄部轻轻敲打培养瓶细胞贴壁一面，观察培养瓶颈处上升的小气泡，待无气泡上升后停止，然后用弯管吸出培养瓶口的气泡，补加培养基至溢出；步骤三、取出胶塞，轻放到培养瓶口，用镊子移动胶塞与培养瓶口重合，用约1.5cm至2cm的封口膜，左短右长拉开，小心轻放拉开，盖在培养瓶盖上，绕半圈后在培养瓶盖上打十字缠绕；步骤四、封好后，把培养瓶放入海绵支架中，贴壁一面朝外侧放入随机定位仪，采用随机模式回转进行培养，12h到24h后收集细胞条件培养基；步骤五、检测收集的条件培养基中纤连蛋白的表达。