[发明专利]一种外周血中抗NY-ESO-1自身抗体的检测方法

摘要

本发明公开了一种外周血中抗NY‑ESO‑1自身抗体的检测方法，所述方法以NY‑ESO‑1重组蛋白为抗原制备抗NY‑ESO‑1抗体，将抗NY‑ESO‑1抗体与胶乳微球偶联制备抗体偶联物，然后将NY‑ESO‑1重组蛋白混合液a与外周血待测样品混合反应5‑10min，最后再加入抗体偶联物，检测546nm处吸光值，根据标准曲线获得样品中抗NY‑ESO‑1自身抗体浓度；本发明还提供一种外周血中抗NY‑ESO‑1自身抗体的化学发光检测方法。本发明所述外周血中抗NY‑ESO‑1自身抗体的检测方法可在生化分析仪和化学发光免疫分析仪等大型自动化仪器上进行大样本自动化检测，灵敏度1‑10ng/mL。

主权项

一种外周血中抗NY‑ESO‑1自身抗体的检测方法，其特征在于所述方法为：以NY‑ESO‑1重组蛋白为抗原制备抗NY‑ESO‑1抗体，将抗NY‑ESO‑1抗体与胶乳微球偶联制备抗体偶联物，然后将NY‑ESO‑1重组蛋白混合液a与外周血待测样品混合，室温反应5‑10min，最后再加入抗体偶联物，检测546nm处吸光值，根据标准曲线获得外周血待测样品中抗NY‑ESO‑1自身抗体浓度；所述NY‑ESO‑1重组蛋白混合液a质量组成为：NY‑ESO‑1重组蛋白100‑200ng/ml，35g/L聚乙二醇‑6000，牛血清白蛋白5g/L，0.05％Tween‑20，NaN₃ 0.05％，溶剂为pH6.8的缓冲液；所述标准曲线按如下方法制备：用NY‑ESO‑1重组蛋白为抗原免疫家兔制备兔抗NY‑ESO‑1特异性IgG抗体，再将兔抗NY‑ESO‑1特异性IgG抗体分别按1000‑62.5μg/ml梯度浓度用含体积浓度0.1‑1％牛血清白蛋白的缓冲液稀释成稀释液，以含所述牛血清白蛋白缓冲液为空白对照，将兔抗NY‑ESO‑1特异性IgG抗体与胶乳微球偶联制备特异性抗体偶联物，然后将NY‑ESO‑1重组蛋白混合液b与不同梯度的稀释液混合，反应5‑10min，最后再加入特异性抗体偶联物，分别测定546nm处吸光值，以吸光值为纵坐标，以稀释液中兔抗NY‑ESO‑1特异性抗体IgG浓度作为横坐标制作标准曲线；所述NY‑ESO‑1重组蛋白混合液b组成同NY‑ESO‑1重组蛋白混合液a。