[发明专利]鸭圆环病毒的实时荧光定量PCR检测方法在审
| 申请号： | 201610321905.8 | 申请日： | 2016-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN105886666A | 公开（公告）日： | 2016-08-24 |
| 发明（设计）人： | 司兴奎;刘玲凤;黎振标 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 广州市红荔专利代理有限公司 44214 | 代理人： | 张文 |
| 地址： | 528231 广东省佛山市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鸭圆环病毒实时荧光定量PCR的检测方法，包括特异性引物设计、标准重组质粒pMD18DuCV构建、实时定量PCR扩增以及标准曲线建立。本检测方法的优点在于：重复性好，重复性试验结果的变异系数均小于2％；灵敏度高，检测方法的检测下限为67.2拷贝/μL；特异性强，溶解曲线单一；检出率高，较常规PCR方法高10.0％；省时直观，检测耗时约3h，可直接通过荧光信号实时观测结果。 | ||
| 搜索关键词： | 圆环 病毒 实时 荧光 定量 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
鸭圆环病毒的实时定量PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)以包含DuCV的患病鸭组织器官中提取的DNA作为待检品，以包含DuCV基因片段的质粒载体作为标准品；分别以待检品和标准品为模板，在包含上游扩增引物DuCV‑F、下游扩增引物DuCV‑R和荧光染料SYBR Green Ⅰ的扩增体系中进行实时荧光定量PCR扩增；所述上游扩增引物DuCV‑F为：5'CGAACATCGCCCATCTCA 3'；所述下游扩增引物DuCV‑R为：5'AAGGCTACGAATCGCAAG 3'；2)扩增过程中PCR仪自动采集标准品和待检品的扩增产物的荧光信号；3)根据标准品的扩增产物的荧光信号与质粒载体的对应关系建立标准曲线，然后根据待检品的荧光信号在标准曲线上的位置，确定待检品中鸭圆环病毒的初始含量。
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