[发明专利]一种基于DNA分子级联信号放大的膜蛋白分析方法

摘要

本发明属于生物蛋白质分子分析技术领域，具体涉及一种基于DNA分子级联信号放大的膜蛋白分析方法。本发明所述膜蛋白分析方法由合成的分子探针特异识别并共价连接到膜蛋白上，由此在膜蛋白上引入DNA扩增引物，加入扩增成分后，利用DNA分子的等温扩增反应，原位扩增出长单链DNA产物，随后加入荧光分子信标，最终通过对荧光的观察和检测实现膜蛋白在质膜表面的原位分析。本发明操作快速、简单、灵敏，避免了传统膜蛋白分析中分离和纯化的繁琐步骤，无需复杂仪器，操作者无需特别训练即可完成。

主权项

1.一种基于非诊断目的DNA分子级联信号放大的膜蛋白原位分析方法，其特征在于，合成的分子探针识别膜蛋白，并通过修饰的光敏交联分子与膜蛋白共价连接，从而在靶标膜蛋白上引入DNA扩增引物，随后加入扩增反应组分，利用DNA滚环扩增反应在原位扩增出长单链DNA，随后加入荧光分子信标，通过对荧光信号的检测实现膜蛋白的原位高灵敏定位和定量分析，其分析的步骤是：(1)分子探针的合成：5’端为光敏交联分子，中间部分为核酸适配体序列，3’端为DNA扩增引物；(2)核酸配适体与细胞膜蛋白特异结合，并由光敏交联分子共价交联到被识别的膜蛋白上；(3)加入反应组分，以分子探针3’端为DNA扩增引物，以环状单链DNA为模板进行DNA滚环扩增反应，扩增出连接在膜蛋白上的长单链DNA；(4)加入荧光分子信标和切刻内切酶，荧光分子信标结合扩增产生的长单链DNA，随后切刻内切酶以长单链DNA为模板，切割荧光分子信标，产生荧光信号，通过对荧光信号的定量检测实现膜蛋白的定量分析。