[发明专利]一种针对神经肌肉病的高通量检测方法

摘要

一种针对神经肌肉病的高通量检测方法，属于生物医药技术领域。其包括以下步骤：提取检测对象的基因组DNA；对提取的基因组DNA进行定量，并取3μg进行如下步骤建库；将基因组DNA进行片段化；将片段化的基因组DNA进行末端修复和3’末端添加碱基A；将3’末端添加碱基A的产物连接扩增接头，以便进行有效连接产物的富集；将连接产物进行PCR扩增，富集有效产物；使用探针对富集的模板中的目标区域进行捕获；将捕获的目标片段分离；加上完整接头获得捕获文库；对文库进行定量操作；上机测序；数据分析得到致病位点相关信息。本发明能够同时对一个样本的多个神经肌肉病相关突变进行分析。

主权项

1.一种探针在制备检测神经肌肉病相关致病突变位点基因的试剂盒中的应用，所述探针包括检测CLCN1、SCN4A、CACNA1S、KCNJ2、TIA1、GNE、MYH7、NEB、FLNC、SEPN1、POMT2、VCP、DMD、MYOT、LMNA、CAV3、CAPN3、DYSF、SGCG、SGCA、SGCB、SGCD、TCAP、TRIM32、POMT1、ANO5、FKTN、BAG3、AGL、DAG1、PLEC和EMD的探针；检测步骤包括：1）提取检测人类的基因组DNA；2）对提取的基因组DNA进行定量，并取3μg进行如下步骤建库；3）将基因组DNA进行片段化；4）将片段化的基因组DNA进行末端修复和3’末端添加碱基A；5）将3’末端添加碱基A的产物连接扩增接头，以便进行有效连接产物的富集；6）将连接产物进行PCR扩增，富集有效产物；7）使用探针对富集的模板中的目标区域进行捕获；8）将捕获的目标片段分离；9）加上完整接头获得捕获文库，其中使用DNA聚合酶对捕获到的目标序列进行PCR扩增；10）对文库进行定量操作；11）上机测序；12）数据分析得到致病位点相关信息，其中，使用以下引物序列进行第一次PCR扩增：Primer F：5’‑ACACTCTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT‑3’；Primer R：5’‑GTACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT‑3’；通用的建库PCR引物进行第二次PCR扩增，PCR引物序列如下：TrueSeq Universal Primer：5’‑AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT‑3’；TrueSeq Primer‑Index X：5’‑CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNNNNNNGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT‑3’；其中，下划线N部分的碱基使用多种碱基组合，从而产生更多的、不同标签的引物。