[发明专利]提取植物基因组DNA的方法有效
| 申请号： | 201610325854.6 | 申请日： | 2016-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN105925564B | 公开（公告）日： | 2018-10-23 |
| 发明（设计）人： | 郑洪坤;刘慧;宋军;杨帆 | 申请（专利权）人： | 北京百迈客生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 101300 北京市顺*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用于提取高完整度植物基因组DNA的方法。所述方法将植物组织在固定液中进行固定，用刀切成小段放置于细胞核分离液中用匀浆器搅拌，随后离心将大部分杂质与细胞核分离，并用percoll细胞分离混合溶液进一步进行核层分离，并最终将细胞核包埋于低熔点琼脂糖凝胶中，最后在胶块中进行蛋白、RNA等物质的去除。 | ||
| 搜索关键词： | 提取 植物 基因组 dna 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提取高分子植物基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)将固定后植物组织与核分离液混合后利用匀浆器在30000‑35000rpm的速度下匀浆处理30‑40秒获得匀浆混合物，用孔径为80‑100μm的滤膜过滤所述匀浆混合物，收集滤液并在2000g‑2500g下离心15‑25min，收集沉淀；(二)用核分离液重悬步骤(一)获得的沉淀，而后加入Triton X‑100至Triton X‑100终浓度为10‑15体积％，获得重悬混合物，用孔径为20‑40μm的滤膜过滤，将滤液部分加到percoll细胞分离混合溶液上方，600g‑650g离心30‑50min后将中间层及中间层下方1‑2ml液体吸出获得核液；(三)用核分离液重悬所述核液后离心去除percoll细胞分离混合溶液并收集沉淀，将沉淀用核分离液重悬并在43‑45℃水浴3.5‑4.5min后与琼脂糖液混匀制胶块；其中，所述percoll细胞分离混合溶液的组成成分包括20‑30体积％的核分离液和70‑80体积％的percoll细胞分离液。
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