[发明专利]一种用于体外检测泛素结合酶活性的系统及检测方法在审
| 申请号： | 201610326713.6 | 申请日： | 2016-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN106011042A | 公开（公告）日： | 2016-10-12 |
| 发明（设计）人： | 崔凤;李国卫;刘译阳;韩燕;赵庆臻;徐国鑫 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12Q1/25;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南诚智商标专利事务所有限公司37105 | 代理人： | 韩百翠 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于体外检测泛素结合酶活性的系统及检测方法。该系统包括：(1)能够表达E1蛋白的原核表达菌株C1感受态细胞；(2)能够同时表达E1蛋白和Ub蛋白的原核表达菌C2感受态细胞；(3)与表达E1蛋白和Ub蛋白质粒复制起点不同的，能够进行原核体外表达待测E2蛋白的质粒P3。将P3分别转入C1和C2感受态细胞，命名为C3CK(负对照)、C3，分别扩大培养，并诱导蛋白表达后收集菌体，进行蛋白质印迹杂交；在C3样品中检测到待测E2蛋白迁移条带，并且迁移大小符合Ub分子量，即可证明此待测E2具有泛素结合酶活性。该方法无需裂解细胞提取蛋白、纯化蛋白，也不需要做体外反应，非常方便、结果更稳定。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 体外 检测 结合 活性 系统 方法 | ||
【主权项】：
一种用于体外检测泛素结合酶活性的系统，其特征是，包括：(1)能够表达E1蛋白的原核表达感受态细胞；(2)能够同时表达E1蛋白和Ub蛋白的原核表达感受态细胞；(3)与表达E1蛋白和Ub蛋白质粒复制起点不同的，能够进行原核体外表达待测E2蛋白的质粒，上述(1)和(2)的原核表达采用的菌株相同。
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