[发明专利]一种靶向CD30的复制缺陷性重组慢病毒CAR-T转基因载体及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种靶向CD30的复制缺陷性重组慢病毒的CAR‑T转基因载体，包括：用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列；用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列；用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40Ori序列；用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；用于真核细胞表达绿色荧光的ZsGreen1绿色荧光蛋白；用于共同转录表达蛋白质的IRES核糖体结合序列；用于嵌合抗原受体基因的真核转录的人EF1α启动子；用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR或三代CAR的嵌合抗原受体；用于增强转基因的表达效率的eWPRE元件。此外，还公开了该载体的构建方法和应用。本发明能显著提高细胞因子的分泌、CAR‑T细胞的体外杀伤作用，临床治疗霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤效果突出。

主权项

1.一种靶向CD30的复制缺陷性重组慢病毒的CAR‑T转基因载体，其特征在于，包括：如SEQ ID NO.2所示的用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.1所示的用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.3所示的用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 Ori序列，用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件，如SEQ ID NO.12所示的用于共同转录表达蛋白质的IRES核糖体结合序列，如SEQ ID NO.14所示的用于嵌合抗原受体基因的真核转录的人EF1α启动子，如SEQ ID NO.13所示的用于增强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，以及用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR或三代CAR的嵌合抗原受体；所述用于组成集识别、传递、启动于一体的二代CAR的嵌合抗原受体包括：如SEQ ID NO.15所示的CD8 leader嵌合受体信号肽、如SEQ ID NO.20所示的CD30单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.19所示的Optimal Linker C、如SEQ ID NO.16所示的CD30单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.21所示的CD8 Hinge嵌合受体铰链、如SEQ ID NO.22所示的CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区、CD28、如SEQ ID NO.23所示的CD137嵌合受体共刺激因子、和如SEQ ID NO.24所示的TCR嵌合受体T细胞激活域；所述用于组成集识别、传递、启动于一体的三代CAR的嵌合抗原受体包括：如SEQ ID NO.15所示的CD8 leader嵌合受体信号肽、如SEQ ID NO.20所示的CD30单链抗体轻链VL、如SEQ ID NO.19所示的Optimal Linker C、如SEQ ID NO.16所示的CD30单链抗体重链VH、如SEQ ID NO.21所示的CD8 Hinge嵌合受体铰链、如SEQ ID NO.22所示的CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区、CD28、如SEQ ID NO.23所示的CD137嵌合受体共刺激因子、如SEQ ID NO.24所示的TCR嵌合受体T细胞激活域、以及如SEQ ID NO.25所示的CD28嵌合受体共刺激因子。