[发明专利]一种以枸杞蜂花粉为原料制备富锌中性糖蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种热水浸提、制备富锌枸杞蜂花粉中性糖蛋白的方法。该方法包括花粉的烘干，粉碎，热水浸提，抽滤并离心取上清，减压浓缩，乙醇沉淀，离心取沉淀，沉淀复溶，透析，冷冻干燥，DEAE‑52柱层析等工序制备枸杞蜂花粉中性糖蛋白。采用ICP‑AES检测分析枸杞蜂花粉中性糖蛋白中微量元素的含量，证明了制备的中性糖蛋白为一种富锌中性糖蛋白。本发明的枸杞蜂花粉中性糖蛋白的制备方法具有提取工艺简单、温和、成本低、不污染环境等优点，且制备的中性糖蛋白富含锌元素，在保健食品及医药行业具有广阔的应用前景。

主权项

一种以枸杞蜂花粉为原料制备富锌中性糖蛋白的方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)将枸杞蜂花粉置于60℃下烘干，粉碎，过60目筛，得到颗粒均匀的粉碎物；(2)将步骤(1)制得的粉碎物，按液料比20mL/g，加去离子水进行热水浸提，提取温度为90℃，时间4h，提取次数2次，得到提取液；(3)将步骤(2)所得到的提取液抽滤、在5000rpm离心机里离心10min，获到上清液；(4)将步骤(3)所得上清液浓缩到合适的体积，然后往浓缩液中加4倍体积的95％乙醇，4℃沉淀24h，在4000rpm离心机里离心15min，然后取沉淀；(5)将步骤(4)所得沉淀物用合适体积的去离子水溶解，并装入8000～14000Kda的透析袋中透析3天；(6)将步骤(5)所得的透析液于45℃下浓缩至合适体积，并冻干得到枸杞蜂花粉糖蛋白粗品；(7)将步骤(6)所得糖蛋白粗品溶解后，上样于DEAE‑52纤维素柱，并用去离子水、0.1mol/L NaCl和0.3mol/L NaCl溶液洗脱；洗脱液分别用苯酚‑硫酸法，紫外分光光度法隔管检测其中的多糖和蛋白质，去离子水洗脱出来的组分1是一种中性糖蛋白，0.1mol/L NaCl洗脱出来的组分2是一种酸性糖蛋白，0.3mol/L NaCl洗脱出来的组分3是另外一种酸性糖蛋白；然后将去离子水洗脱出来的组分1收集，并将液体减压浓缩至合适的体积，去离子水透析3天，浓缩后冷冻干燥，得到枸杞蜂花粉中性糖蛋白。制备的中性糖蛋白为白色絮状物，其中多糖含量为50.41％，蛋白质含量为1.64％；(8)将步骤(7)所得中性糖蛋白用分子排阻色谱检测其纯度，峰型单一对称，表明得到的中性糖蛋白为较纯品；制备的枸杞蜂花粉中性糖蛋白为白色絮状物，用ICP‑AES检测蜂花粉中微量元素的含量，结果显示，其中性糖蛋白中锌元素的含量为6.97μg/mg，远高于该糖蛋白中其他微量元素的含量。