[发明专利]CRISPR-Cas9引导序列及其引物、转基因表达载体及其构建方法

摘要

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种CRISPR‑Cas9引导序列引物、转基因表达载体及其构建方法。该CRISPR‑Cas9引导序列sgRNA包括针对SIDT1基因的靶点位于E1外显子上的Target site‑1和针对SIDT1基因的靶点位于E2外显子上的Target site‑2；其中，Target site‑1的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，Target site‑2的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。该CRISPR‑Cas9转基因表达载体，所述表达载体包括在重组穿梭cas9工具质粒的BsmB I和Bbs I酶切位点连接有cas9引导序列Target site‑1和Target site‑2。本发明所述的重组穿梭cas9工具质粒能够快速的装配上针对基因组两个靶位点的引导序列进而包装成针对两个靶位点重组腺病毒载体，并且可单独完成对大片段基因组的编辑，不依赖于协同作用；且构建过程简单快捷，发挥基因组大片段编辑作用的效率高。

主权项

一种CRISPR‑Cas9引导序列sgRNA，所述sgRNA包括针对SIDT1基因的靶点位于E1外显子上的Target site‑1和针对SIDT1基因的靶点位于E2外显子上的Target site‑2；其中，Target site‑1的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，Target site‑2的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。