[发明专利]一种检测炎症性肌病特异性自身抗体MDA5的非放射标记免疫沉淀方法及应用在审
| 申请号： | 201610332542.8 | 申请日： | 2016-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN105974124A | 公开（公告）日： | 2016-09-28 |
| 发明（设计）人： | 张华莉;王莉;左晓霞;朱红林;罗卉;李懿莎;贺维佳;刘可;刘梅冬;陈广文;肖献忠 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/564;C12N15/85;C12N9/14 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所 43205 | 代理人： | 许伯严 |
| 地址： | 410083*** | 国省代码： | 湖南;43 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本申请公开了一种检测炎症性肌病特异性自身抗体MDA5的非放射标记免疫沉淀方法，本发明通过提供下述方法：构建含MDA5C末端(447‑1025aa)以及N端带有Myc标签的质粒pCMV‑myc‑MDA5C，瞬时转染HEK293细胞，炎症性肌病患者的待测血清与过表达MDA5C末端的HEK293细胞裂解液进行免疫沉淀，然后进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用c‑myc抗体检测沉淀的MDA5C末端，解决了目前国内还没有商业化的检测MDA5抗体的ELISA试剂盒以及免疫印迹膜条的问题，以及自行包被MDA5抗原的ELISA试剂盒的高成本、高假阳性率和放射标记免疫沉淀法的安全性等问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 炎症 性肌病 特异性 自身抗体 mda5 放射 标记 免疫 沉淀 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种检测炎症性肌病特异性自身抗体MDA5的非放射标记免疫沉淀方法，其特征在于，包括以下步骤：1)利用引物MDA5‑F和MDA5‑R从pENTER‑MDA5质粒中扩增人MDA5的C末端；2)回收纯化PCR片段克隆至pCMV‑myc载体，构建含MDA5C末端以及N端带有Myc标签的质粒pCMV‑myc‑MDA5C，酶切鉴定确定pCMV‑myc‑MDA5C的插入子；3)测序证实MDA5C末端序列和读码框的准确性；4)将pCMV‑myc‑MDA5C质粒瞬时转染HEK293细胞48小时，采用western Blot以及c‑myc抗体或MDA5抗体确定MDA5C末端在HEK293细胞中的过表达；5)采用20ul MDA5抗体阳性的炎症性肌病患者血清或健康对照血清与200ug过表达MDA5C端的细胞裂解液进行免疫沉淀，然后进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用c‑myc抗体进行检测。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中南大学，未经中南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610332542.8/，转载请声明来源钻瓜专利网。
