[发明专利]miR-34a生物纳米材料的构建方法及放射增敏应用

摘要

本发明属于生物纳米材料及医学放射治疗领域，具体涉及miR‑34a生物纳米材料的构建方法及放射增敏应用，包括miR‑34a表达载体的构建与转染和miR‑34a外泌体的分离。miR‑34a外泌体生物纳米材料能够高效将miR‑34a释放进入到细胞内。miR‑34a外泌体生物纳米材料中的miR‑34a在各种环境中非常稳定。便于生产、储存、使用。miR‑34a外泌体生物纳米材料低毒。miR‑34a外泌体本身具有在细胞、组织中传递信号的功能，能够在体内外释放miR‑34a，可改善实体瘤的释放效率，并可用于肿瘤的放射治疗。

主权项

1.miR‑34a生物纳米材料的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)miR‑34a表达载体的构建与转染：a．合成miR‑34a前体的寡聚核苷酸序列miR‑34a前体的寡聚核苷酸正向引物S1 5′ ́‑ TGCTG CGTCACCTCTTAGGCTTGGA‑ 3′ ́；miR‑34a前体的寡聚核苷酸反向引物S2 5′ ́‑ CCTG CATTGGTGTCGTTGTGCTCT C‑ 3′；b．退火产生miR‑34a前体双链寡聚核苷酸；c. 将miR‑34a前体双链寡聚核苷酸克隆到pcDNA™6.2GW/miR载体中；d．转化含有miR‑34a前体双链寡聚核苷酸的载体并扩增、纯化目标载体质粒；e．目标载体质粒转染3SB淋巴瘤细胞并培养；(2)miR‑34a外泌体的分离：收集上述转染3SB细胞培养液，应用差异离心技术提取细胞培养液中的外泌体；miR‑34a外泌体的粒径范围为50‑250nm，其中90％的外泌体粒径在50‑100nm之间，粒子数量在2×10¹¹／ml至6×10¹¹／ml。