[发明专利]一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用，属于生物制药技术领域。本发明所述的病毒样颗粒疫苗包括可溶性蛋白，该可溶性蛋白为大肠杆菌表达猪圆环病毒II型完整衣壳蛋白基因得到的蛋白。其中该衣壳蛋白基因是筛选自目前国内猪圆环病毒II型流行毒株的衣壳蛋白基因，并且经过密码子优化，不仅能在大肠杆菌中大量表达，而且表达的可溶性蛋白还能形成病毒样颗粒。应用本发明的方法制备的猪圆环病毒II型亚单位疫苗具有抗原纯度高、免疫原性强等特点，此外该疫苗制备过程简单，生产成本低廉，有很好的应用前景。

主权项

一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)合成目的基因：合成两端加入酶切位点的如SEQ ID NO：2的基因序列，基因命名为rORF2；(2)重组表达载体质粒的构建：将步骤(1)中获得的rORF2与pET‑43.1a空载体分别进行双酶切，然后连接、转化；获取单菌落，培养后之后抽提质粒保存待用，重组质粒命名为pET‑43.1a‑rORF2；(3)重组表达菌株的构建：将步骤(2)中获得的质粒转化大肠杆菌BL‑21(DE3)，获得单菌落，经检测正确后保存，并命名为pET‑43.1a‑rORF2菌株，即为重组表达菌株；(4)重组蛋白的表达、纯化和去标签：将步骤(3)中构建成功的重组表达菌株pET‑43.1a‑rORF2进行培养，并加入IPTG诱导表达；收集诱导后的菌体，破碎后经Ni亲和层析柱纯化，在纯化后期加入蛋白酶将目的蛋白与标签切开，收集目的蛋白；(5)疫苗的制备：将步骤(4)中纯化出来的目的蛋白进行浓度测定，然后与佐剂混合、乳化，获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗。