[发明专利]用复合载体磁性纳米颗粒固定化双酶制备活性肽的方法

摘要

本发明公开了一种用复合载体磁性纳米颗粒固定化双酶制备活性肽的方法，包括如下步骤：1)制备Fe₃O₄磁性纳米颗粒；2)配制壳聚糖溶液和多聚磷酸钠溶液并混合，得到复合载体溶液，加入Fe₃O₄磁性纳米颗粒，搅拌，磁分离，水洗涤，干燥，得复合载体磁性纳米颗粒；3)配制碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶混合溶液，加入复合载体磁性纳米颗粒，搅拌，滴加戊二醛水溶液，交联‑吸附，得复合载体磁性纳米颗粒固定化双酶；4)配制植源性蛋白溶液，加入固定化双酶，制得活性肽；本发明环保、价廉，还充分发挥了两种蛋白酶复合的优势，提高了活性肽制备的得率以及抗氧化活性。本发明制得的复合载体磁性纳米颗粒固定化酶粒径小，具有超顺磁性。

主权项

用复合载体磁性纳米颗粒固定化双酶制备活性肽的方法，其特征是包括如下步骤：1)将三价铁盐和二价铁盐加入水，使二价铁的摩尔浓度为0.1～1.5M，升温至75～95℃，在1200～1500rpm搅拌条件下，滴加氨水，使pH为9～11，磁分离，水洗涤，干燥，得Fe₃O₄磁性纳米颗粒；Fe²⁺和Fe³⁺的摩尔比为1:2；2)称取脱乙酰度≧90％的壳聚糖，溶解于加热的体积浓度为0.5～2％的冰醋酸水溶液，配制1～3mg/mL壳聚糖溶液；称取多聚磷酸钠，溶解于去离子水，配制1～2mg/mL多聚磷酸钠溶液；按壳聚糖和多聚磷酸钠的质量比1～4:1将壳聚糖溶液和多聚磷酸钠溶液混合，得到复合载体溶液，加入所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒，1200～1500rpm搅拌20～40min，磁分离，水洗涤，干燥，得复合载体磁性纳米颗粒；所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒质量与复合载体溶液中壳聚糖和多聚磷酸钠的总质量的比为10:1～5；3)配制2～10mg/mL碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶混合溶液，加入所述复合载体磁性纳米颗粒，在1200～1500rpm搅拌条件下，滴加0.05～1体积倍的体积浓度为1％～5％戊二醛水溶液，滴加完毕后，在搅拌下交联‑吸附2～10h，磁分离，水洗涤，干燥，得复合载体磁性纳米颗粒固定化双酶；所述碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶的质量比为0.5～4:1；所述复合载体磁性纳米颗粒质量与碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶混合溶液中的碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶的总质量的比为1～8:1。4)配制植源性蛋白溶液，调节pH为8～9，加入所述复合载体磁性纳米颗粒固定化双酶，在50～55℃条件下反应1～2h，制得活性肽；所述复合载体磁性纳米颗粒固定化双酶与植源性蛋白的质量比为1:4～25。