[发明专利]利用拆分Cas系统进行基因编辑和表达调控方法

摘要

本发明公开了利用拆分Cas系统进行基因编辑和表达调控方法。本发明提供了蛋白组，将Cas9蛋白氨基酸序列从第不同位点拆分，形成两段蛋白组成蛋白组；本发明的实验证明了，Intein介导的拆分的Ca9系统可以高效的实现基因编辑与基因线路的转录激活调控。本发明提供了运用拆分的Cas9系统结合肿瘤细胞特异性启动子可以进行膀胱癌细胞特异性检测。

主权项

1.融合蛋白组，为如下A）‑C）中任一种：A)由融合蛋白Cas9N204‑InteinN和融合蛋白InteinC‑Cas9C204组成的融合蛋白组；所述融合蛋白Cas9N204‑InteinN为自N端至C端依次由蛋白Cas9N204与InteinN蛋白组成；所述融合蛋白InteinC‑Cas9C204为自N端至C端依次由InteinC蛋白与蛋白Cas9C204组成；所述蛋白Cas9N204和所述蛋白Cas9C204是将Cas9蛋白氨基酸序列从第203‑204位之间拆分，形成的两段蛋白；B)由融合蛋白Cas9N469‑InteinN和融合蛋白InteinC‑Cas9C469组成的融合蛋白组；所述融合蛋白Cas9N469‑InteinN为自N端至C端依次由将蛋白Cas9N469与所述InteinN蛋白组成；所述融合蛋白InteinC‑Cas9C469为自N端至C端依次由所述InteinC蛋白和蛋白Cas9C469组成；所述Cas9N469和蛋白Cas9C469是将Cas9蛋白氨基酸序列从第468‑469位之间拆分，形成的两段蛋白；C) 由融合蛋白Cas9N1154‑InteinN和融合蛋白InteinC ‑Cas9C1154组成的融合蛋白组；所述融合蛋白Cas9N1154‑InteinN为自N端至C端依次由蛋白Cas9N1154与所述InteinN蛋白组成；所述融合蛋白InteinC ‑Cas9C1154为自N端至C端依次由所述InteinC蛋白和蛋白Cas9C1154在组成；所述蛋白Cas9N1154和蛋白Cas9C1154是将Cas9蛋白氨基酸序列从第1153‑1154位之间拆分，形成的两段蛋白；所述InteinN蛋白氨基酸序列为序列表中序列4第1‑89位；所述InteinC蛋白氨基酸序列为序列表中序列4第90‑126位；所述Cas9蛋白为SpCas9或dCas9；所述SpCas9的氨基酸序列为序列表中序列2，所述dCas9的氨基酸序列为序列表中序列6或序列48。