[发明专利]一种用于TALEN高效构建的双RVD单元模块库及TALEN构建方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种用于TALEN高效构建的双RVD单元模块库。本发明针对现有GG‑Vector TALEN组装方法的诸多不足，从头设计了“双RVD单元”(two‑RVD unite)的TALEN组装策略。本发明的技术方案是一种用于TALEN高效构建的双RVD单元模块库，包括独立包装的144个双RVD单元模块、8个单RVD单元模块和24个末位RVD单元。本发明公布了一种基于Golden Gate克隆法的双RVD单元模块库，通过一次反应，可以构建靶向15～19bp任意DNA序列的TALEN表达载体。

主权项

1.一种用于TALEN构建的双RVD单元模块库，其特征在于：包括分别独立包装的144个双RVD单元模块、8个单RVD单元模块和24个末位RVD单元；所述的144个双RVD单元模块用于识别任意组合的相邻的2个碱基；所述的8个单RVD单元模块分为M08和M09两组，每组4个单RVD单元模块，M08用于靶序列为16bp时识别第15位的碱基，M09组用于靶序列为18bp时识别第17位的碱基；所述的24个末位RVD单元分为左侧组和右侧组，每组12个，左侧组的末位RVD单元3’端融合FokⅠ异源二聚体的单体Ⅰ，右侧组末位RVD单元模块3’端融合FokⅠ异源二聚体的单体Ⅱ；左侧组和右侧组分别包括识别15bp长度的靶序列第15位碱基的4个末位RVD单元，识别16bp长度的靶序列第16位碱基和识别17bp长度的靶序列第17位碱基的4个末位RVD单元，识别18bp长度的靶序列第18位碱基和识别19bp长度的靶序列第19位碱基的4个末位RVD单元。