[发明专利]用于制药废水处理的交联β-内酰胺酶聚集体的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于制药废水处理的交联β‑内酰胺酶聚集体的制备方法，将重组β‑内酰胺酶基因序列转入宿主细胞大肠杆菌E.coli Top10中，得到重组菌，再通过诱导表达、超声破碎、离心处理、取上清得到粗酶液；加入牛血清蛋白作为聚集剂及保护剂到粗酶液中，进行沉淀并聚集，形成酶聚集体，将得到酶聚集体用双功能试剂进行交联，从而制备得到交联β‑内酰胺酶聚集体。本发明制备得到的交联β‑内酰胺酶聚集体，经测试酶活高，稳定性好，可重复利用，用于抗生素废水治理，其化学需氧量降低了72.9％，该交联β‑内酰胺酶聚集体在制药工业处理抗生素废水中显示出重要的应用价值。

主权项

一种用于制药废水处理的交联β‑内酰胺酶聚集体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、将重组β‑内酰胺酶基因转入宿主细胞大肠杆菌E.coli Top10中，得到重组菌，进行原核体外重组表达；(2)、将重组菌进行诱导表达，得到诱导菌，对诱导菌进行离心处理，得到菌体，然后加入缓冲液，并进行超声破碎，离心处理，取上清，得到粗酶液；(3)、取25mg/mL粗酶液1mL加入1/3粗酶液质量的BSA(牛血清蛋白)，作为聚集剂及保护剂，放入25mL烧杯中冰浴条件下在磁力搅拌器上搅拌20分钟；5mL 75％的硫酸铵溶液作为沉淀剂，冰浴条件下，逐滴加入饱和硫酸铵(沉淀剂)，搅拌1小时；常温(25℃)条件下，浓度0.5％的戊二醛作为交联的双功能试剂，逐滴加入戊二醛(双功能试剂)，交联2小时；所得悬液4℃条件下，4000rpm离心15分钟，得沉淀即为固化后的酶；固定化后的酶再悬浮于20ml的50mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)中，冰浴条件下搅拌30分钟，这样反复重复三次，所得悬液4℃条件下，4000rpm离心15分钟，得沉淀即为所得的交联β‑内酰胺酶聚集体。