[发明专利]一种以搔菌余料提取液为原料制备真姬菇液体菌种的方法

摘要

本发明公开了一种以搔菌余料提取液为原料制备真姬菇液体菌种的方法，包括以下步骤：制备搔菌余料提取液、配置摇瓶培养基、接种、菌球形态及菌丝含量测定、酶活力测试、发酵罐扩培、制作栽培瓶；其中，摇瓶培养基的配方为：白砂糖36g、玉米粉3.0g、140目豆粕粉8.0g、KH₂PO₄分析纯1.8g、MgSO₄·7H₂O分析纯1.8g、搔菌余料提取液2000mL。本发明在传统摇瓶培养基的基础上添加了搔菌余料作为原料，不仅降低了生产成本，还大幅度缩短了生产周期，使总产量显著提高，符合农业经济的可持续发展战略。

主权项

一种以搔菌余料提取液为原料制备真姬菇液体菌种的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：A、制备搔菌余料提取液：富集真姬菇搔菌后的废弃余料，按照料水比1：25进行配置，配置完成后室温下静止24h，然后用八层纱布或过滤装置过滤，过滤后的滤液即为搔菌余料提取液；B、配置摇瓶培养基：摇瓶培养基的配方为：白砂糖36g、玉米粉3.0g、140目豆粕粉8.0g、KH₂PO₄分析纯1.8g、MgSO₄·7H₂O分析纯1.8g、搔菌余料提取液2000mL；调pH至6.0～6.9后，将上述培养基分装至含转子的三角烧瓶中；用棉塞塞紧三角烧瓶瓶口，并用铝箔纸包紧瓶口，121℃下高压灭菌30～60min；灭菌结束后，冷却至室温；C、接种：在无菌环境下，用接种环钩取真姬菇母种菌块8～10块，转接到冷却后的摇瓶培养基中，20～25℃条件下摇瓶培养7天，摇床转速150r/min；D、菌球形态及菌丝含量测定：摇瓶培养结束后，首先观察培养瓶内菌球形态及液体澄清度，然后用pH计测试菌液的pH，判断菌种的生长状况；再随机抽取三个摇瓶菌种，放在磁力搅拌器上将菌种搅碎，用注射器吸取10g菌液于已知质量的离心管中，配平后离心弃上清液，通过称量沉淀和离心管的质量，计算出菌丝的平均含量，并与常规方法制备的菌种菌丝含量相对比；E、酶活力测试：随机抽取九个摇瓶菌种，平均分成三组；首先制备粗酶液并绘制葡萄糖标准曲线；将三组摇瓶菌种在磁力搅拌器上搅拌破碎，分别取5mL破碎后的菌液于10mL离心管内,3500r/min离心10min,取上清液做为粗酶液；得到的三组粗酶液分别进行羧甲基纤维素酶酶活、半纤维素酶酶活、漆酶酶活的测试，并与常规方法制备的粗酶液酶活进行对比；F、发酵罐扩培：发酵培养基按照摇瓶培养基配方进行等比例配制；按每个发酵罐700L进行培养基的配制，调pH至6.0～6.9后高压灭菌；将发酵罐内的发酵培养基冷却至室温，接种步骤C中摇瓶培养结束后的菌液；20～25℃条件下发酵培养7天，通气量0.1MP；G、制作栽培瓶：称取玉米芯、米糠、麸皮、棉籽壳、玉米粉、木屑，将上述原材料搅拌混合25min，然后边加搔菌余料提取液边继续搅拌40～50min，调制成含水量为65％±1、pH为6.3～6.9的混合材料；在栽培瓶中种入上述混合材料，使每瓶标重为1020±20g；采用五孔打眼法，使料面平整距离栽培瓶瓶口2.0cm，121℃高压灭菌80～100min，冷却至室温，最后接种步骤F中发酵扩培后的液体菌种。