[发明专利]一种基于具有过氧化物酶活性的纳米酶的ELISA检测方法有效

专利信息
申请号: 201610347888.5 申请日: 2016-05-23
公开(公告)号: CN106018819B 公开(公告)日: 2017-11-10
发明(设计)人: 杨朝勇;刘芳;李久兴;何梦逸;朱志 申请(专利权)人: 厦门大学
主分类号: G01N33/58 分类号: G01N33/58;G01N33/543;B01J31/06
代理公司: 厦门市首创君合专利事务所有限公司35204 代理人: 张松亭
地址: 361000 *** 国省代码: 福建;35
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摘要: 发明公开了一种基于具有过氧化物酶活性的纳米酶的ELISA检测方法,适用于双抗体夹心法或双抗原夹心法,先在金纳米颗粒上修饰检测抗体/检测抗原;再进行ELISA检测形成捕获抗体/捕获抗原‑待测抗原/待测抗体‑检测抗体/检测抗原‑金纳米颗粒复合物;然后进行银铂染,在金纳米颗粒表面包裹银壳层和铂壳层,得到具有过氧化物酶活性的纳米酶Au@AgPt颗粒,再利用其催化过氧化物酶底物得到有色产物,从而可以检测得到待测抗原/待测抗体的量。本发明采用先修饰后成酶的方法,具有简单、快捷的优点和很好的稳定性,能够有效避免非特异性吸附及修饰导致的纳米酶颗粒催化活性下降,为环境监测和疾病诊断提供新的平台。
搜索关键词: 一种 基于 具有 过氧化物 活性 纳米 elisa 检测 方法
【主权项】:
一种基于具有过氧化物酶活性的纳米酶的ELISA检测方法,其特征在于:适用于双抗体夹心法或双抗原夹心法,包括:a)根据待测样品中待测抗原的种类选择相应的捕获抗体和检测抗体;b)在粒径5~30nm的金纳米颗粒上修饰步骤a)所述的检测抗体,得到修饰有检测抗体的金纳米颗粒;c)进行ELISA检测:包被捕获抗体→加入待测样品使待测抗原与捕获抗体结合→加入步骤b)得到的修饰有检测抗体的金纳米颗粒并使待测抗原与其中的检测抗体结合,形成捕获抗体‑待测抗原‑检测抗体‑金纳米颗粒复合物;d)对步骤c)得到的捕获抗体‑待测抗原‑检测抗体‑金纳米颗粒复合物进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5~250μM和0.04~5mM,利用对苯二酚还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtCl62‑溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25~1mM和2~50mM,利用抗坏血酸还原PtCl62‑以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层,得到具有过氧化物酶活性的纳米酶Au@AgPt颗粒,形成捕获抗体‑待测抗原‑检测抗体‑Au@AgPt颗粒复合物;e)在0.1~10M过氧化氢存在条件下,利用步骤d)得到的捕获抗体‑待测抗原‑检测抗体‑Au@AgPt颗粒复合物中具有过氧化物酶活性的纳米酶Au@AgPt颗粒催化过氧化物酶底物得到产物,检测产物的量以得到待测抗原的量;或,a’)根据待测样品中待测抗体的种类选择相应的捕获抗原和检测抗原;b’)在粒径5~30nm的金纳米颗粒上修饰步骤a’)所述的检测抗原,得到修饰有检测抗原的金纳米颗粒;c’)进行ELISA检测:包被捕获抗原→加入待测样品使待测抗体与捕获抗原结合→加入步骤b’)得到的修饰有检测抗原的金纳米颗粒并使待测抗体与其中的检测抗原结合,形成捕获抗原‑待测抗体‑检测抗原‑金纳米颗粒复合物;d’)对步骤c’)得到的捕获抗原‑待测抗体‑检测抗原‑金纳米颗粒复合物进行银铂染:加入Ag+溶液和对苯二酚并使其终浓度分别为62.5~250μM和0.04~5mM,利用对苯二酚还原Ag+以在复合物中的金纳米颗粒表面包裹银壳层;洗涤;加入PtCl62‑溶液和抗坏血酸并使其终浓度分别为0.25~1mM和2~50mM,利用抗坏血酸还原PtCl62‑以在包裹了银壳层的金纳米颗粒表面再包裹铂壳层,得到具有过氧化物酶活性的纳米酶Au@AgPt颗粒,形成捕获抗原‑待测抗体‑检测抗原‑Au@AgPt颗粒复合物;e’)在0.1~10M过氧化氢存在条件下,利用步骤d’)得到的捕获抗原‑待测抗体‑检测抗原‑Au@AgPt颗粒复合物中具有过氧化物酶活性的纳米酶Au@AgPt颗粒催化过氧化物酶底物得到产物,检测产物的量以得到待测抗体的量。
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