[发明专利]一种具有高丁醇耐受性的大肠杆菌菌株构建方法

摘要

本发明通过随机突变全局转录因子σ⁷⁰编码基因rpoD筛选具有高丁醇耐受性的大肠杆菌菌株，属于生物工程技术领域。本发明采用随机突变法构建全局转录因子σ⁷⁰编码基因rpoD的突变文库，筛选获得了一株携带σ⁷⁰突变基因rpoD^M2的大肠杆菌E.coli JM109/pHACMB8，可耐受2％(v/v)丁醇。本发明为具有高丁醇耐受性微生物菌株的构建提供了理论依据和有效方法。

主权项

采用随机突变全局转录因子σ70编码基因rpoD的方法，获得一种显著提高大肠杆菌丁醇耐受性的σ70突变基因rpoD^M2，其特征在于：rpoD^M2的氨基酸序列为SEQ ID NO:2；与野生型σ⁷⁰基因rpoD的氨基酸序列SEQ ID NO:1相比，其特点为：(1)该σ70突变基因rpoD^M2，携带三个突变位点，分别为：Ile41Leu，Glu57Asp，Pro97Gln。(2)携带该σ70突变基因rpoD^M2的大肠杆菌E.coli JM109/pHACMB8能够耐受2％(v/v)丁醇，而野生型大肠杆菌在0.1％(v/v)丁醇浓度下就停止生长。