[发明专利]一种建立断奶仔猪炎症反应模型的方法及应用

摘要

本发明公开一种断奶仔猪炎症反应模型的建立方法及应用。它是用致病性大肠杆菌攻毒断奶仔猪来探讨该病原菌对仔猪血液中白细胞数量和血清中肿瘤坏死因子‑α（TNF‑α）浓度的影响。致病性大肠杆菌菌液浓度为1×10¹⁰~1×10¹¹cfu结果表明：试验组显著提高仔猪血液中白细胞数量和血清中TNF‑α的浓度。由此可见，适当剂量的致病性大肠杆菌攻毒断奶仔猪能够诱导仔猪发生炎症反应。

主权项

一种建立断奶仔猪炎症反应模型的方法，其特征在于在病原菌使用中选择致病性大肠杆菌，对仔猪进行灌服，按如下的步骤进行：（1）致病性大肠杆菌攻毒用菌液的制备：将致病性大肠杆菌甘油菌液按照0.1%(w/w)的接种量转接入小量新鲜LB培养液中，培养18小时后，再按照0.1%(w/w)的接种量接种入大量新鲜LB培养液中，37℃，150 rpm，培养18小时后，4℃，3000rpm离心集菌，离心时间以大肠杆菌沉下来为准，弃去培养液，用无菌生理盐水洗涤1次，4℃，3000rpm离心集菌，弃去洗涤液，加入5~10 mL生理盐水，4℃保存，待攻毒用；将待攻毒用的大肠杆菌，用生理盐水倍比稀释后，在LB琼脂板中进行CFU计数，确定攻毒用大肠杆菌的浓度；(2)试验动物及分组：采用单因子试验设计，选取健康去势杜×长×大三元杂交断奶仔猪6头，随机分为2组，每组3头猪，试验组每公斤体重灌服致病性大肠杆菌，菌液浓度为1× 10¹⁰~1× 10¹¹cfu，对照组每公斤体重灌服等体积的生理盐水；（3）试验规程:1）试验在一个100 m²的动物房里进行，每头猪单笼饲养，试验期5天,饲养管理按照仔猪常规程序进行，仔猪自由采食饮水4天，攻毒前12 h停止供料，攻毒前2 h停止供水，攻毒前对每头猪进行前腔静脉采血，攻毒时对每头猪称重，根据体重计算攻毒剂量，试验组仔猪灌服致病性大肠杆菌，对照组仔猪灌服生理盐水；2）攻毒后2 h开始供水，仍继续停止供料直至实验结束；攻毒后3、6、12和24 h分别对每头猪进行前腔静脉采血；(4)测定指标：1）血液中白细胞数目测定：用含有乙二胺四乙酸二钾的抗凝血真空管采集前腔静脉血1 mL，颠倒4~5次充分混匀，进行血常规检测；2）血清中促炎性细胞因子测定：采用5 mL灭菌注射器前腔静脉采血1 mL，室温放置2 h后，常规方法分离血清，测定血清中的细胞因子。