[发明专利]一种布鲁氏菌感染的检测装置

摘要

本发明公开了一种布鲁氏菌感染的检测装置，包括试纸条；试纸条的层析膜上设有布鲁氏菌抗原检测区、布鲁氏菌抗体检测区。该布鲁氏菌感染的检测装置，其同时检测样本中布鲁氏菌抗原和抗体，多种外膜蛋白的联合应用，可有效减少假阳性结果的出现，双抗原夹心和双抗体夹心法较传统的间接法可以提高检测的灵敏性和特异性，用于布鲁氏菌病的快速检测；解决了目前布鲁氏菌病检测中存在的检测周期长、特异性差、灵敏性低的问题以及出现干扰性强、易出现假阳性或假阴性的问题。

主权项

1.一种检测布鲁氏菌感染的装置，包括试纸条；所述试纸条的制备方法为：（1）纳米颗粒标记检测抗体的制备：取10ml粒径40nm的纳米金颗粒，加入90μg布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体；室温反应15min；加入BSA至终浓度1%（W/V)，继续室温反应15min；离心，用1ml 复溶液重悬颗粒，备用；其中所述复溶液为10mM pH8.0Tris‑HCl和0.5%BSA；（2）纳米颗粒标记OMP28蛋白的制备：取10ml粒径40nm的纳米金颗粒，加入140μgOMP28蛋白；室温反应15min；加入BSA至终浓度1%（W/V)，继续室温反应15min；离心，用1ml 复溶液重悬颗粒，备用；其中所述复溶液为10mM pH8.0Tris‑HCl和0.5%BSA；（3）纳米颗粒标记OMP25蛋白的制备：取10ml粒径40nm的纳米金颗粒，加入210μgOMP25蛋白；室温反应15min；加入BSA至终浓度1%（W/V)，继续室温反应15min；离心，用1ml 复溶液重悬颗粒，备用；其中所述复溶液为10mM pH8.0Tris‑HCl和0.5%BSA；（4）纳米颗粒标记OMP16蛋白的制备：取10ml粒径40nm的纳米金颗粒，加入140μgOMP16蛋白；室温反应15min；加入BSA至终浓度1%（W/V)，继续室温反应15min；离心，用1ml 复溶液重悬颗粒，备用；其中所述复溶液为10mM pH8.0Tris‑HCl和0.5%BSA；（5）层析膜的制备：往密理博CN95硝酸纤维素膜上按照0.8μl/cm的量依次喷涂浓度为2.5mg/ml的OMP16蛋白、2mg/ml的布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体、1mg/ml的OMP25蛋白、2mg/ml的OMP28蛋白、0.5mg/ml羊抗鼠IgG，置于37℃干燥2h，备用；（6）结合垫的制备：将纳米颗粒标记的检测抗体和纳米颗粒标记的检测抗原等体积混匀；按照5μl/cm喷涂至8964玻璃纤维上，于37℃干燥，备用；（7）样品垫的制备：用20mM pH8.0 Tris‑HCl、1%BSA、0.5%Tween 20浸泡无纺布 10min；置于37℃干燥，备用；（8）试纸条的制备：将样品垫、结合垫、层析膜、吸水垫依次搭接粘贴到PVC底板，裁成3.5mm宽，置于4℃干燥保存；其中，由样品垫到吸水垫方向依次为：OMP16蛋白、布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体、OMP25蛋白、OMP28蛋白、羊抗鼠IgG。